p38蛋白激酶在高盐诱导蛋白尿中的作用及其分子机制

发布时间：2017-04-24 10:13

  本文关键词：p38蛋白激酶在高盐诱导蛋白尿中的作用及其分子机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:蛋白尿是肾脏疾病常见的临床表现之一,其发病机制尚未得到明确,因此也未有针对性药物治疗,p38蛋白激酶是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员之一,也是控制炎症反应的最重要成员,可以因高渗,紫外线等而激活。本课题主要是探讨p38蛋白激酶在高盐诱导蛋白尿中的作用,并从体内、体外实验探讨其分子机制。目的就是在了解机体处于疾病状态下高盐诱导蛋白尿的发病机制的基础上研究其靶向治疗药物。方法:1.将ICR小鼠36只(雄性,8-10周)随机分为六组,每组各6只,分别为正常小鼠高盐组,糖尿病小鼠高盐组,糖尿病小鼠对照组,单侧肾脏切除小鼠高盐组,单侧肾脏切除小鼠对照组,单侧肾脏切除小鼠高盐+p38抑制剂(SB202190)组。2.糖尿病小鼠组及单侧肾脏切除小鼠组(1).用1%链脲佐菌素(STZ)给小鼠腹腔注射,剪鼠尾巴测血糖,血糖16mmol/L,并维持稳定即糖尿病小鼠建模成功,四周后收集尿液。(2).单侧肾脏切除小鼠即采用左侧卧位,切除右侧肾脏。1周后收集尿液。(3).给予4%高盐水喂养糖尿病、单侧肾脏切除高盐组及正常高盐组的小鼠,自由饮。给予无盐水喂养各组对照组小鼠,自由饮,收集六组小鼠饮水12h,24h,36h,48h后的尿液,及停盐水后12h,24h,36h的尿液。3.单侧肾脏切除+p38抑制剂组小鼠在喂养4%高盐水24h后腹腔注射一次p38抑制剂(SB202190),按上述时间点停盐,并收集尿液。4.用考马斯亮蓝G250染色法,Elisa测尿白蛋白。取单侧肾脏切除高盐组及其对照组的脾脏组织,应用PCR技术检测NFAT5和IL-13 m RNA的表达情况。5.将ICR小鼠随机分组,分为两组,各组6只,一组为正常小鼠组,二组为单侧肾脏切除组。6.分别取出正常小鼠组和单侧肾脏切除组小鼠的脾脏、骨髓组织,分离单个核细胞,设立高盐组、高盐+p38抑制剂组(SB202190)和对照组,予细胞培养。采用PCR技术检测NFAT5和IL-13 m RNA的表达情况。结果:1.考马斯亮蓝染色:糖尿病,单侧肾脏切除小鼠高盐组尿蛋白明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01),两种模型的高盐组尿蛋白也明显高于正常小鼠高盐组,差异有统计学意义(P0.01)。单侧肾脏切除+p38抑制剂组于24h后尿蛋白明显低于单侧肾脏切除高盐组,差异有统计学意义(P0.01)。Elisa:结果同考马斯亮蓝染色。PCR:单侧肾脏侧切除高盐组脾脏组织NFAT5与其对照组表达无明显差异,差异无统计学意义(P0.05)IL-13的表达明显高于单侧肾脏切除对照组,差异有统计学意义(P0.01)。2.细胞培养后,PCR:高盐组NFAT5与IL-13明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01),高盐+p38抑制剂组NFAT5与IL-13表达明显低于高盐组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:在糖尿病及单侧肾脏切除的小鼠中,予4%高盐水喂养后,尿蛋白明显高于其模型对照组,并也明显高于正常小鼠高盐组的尿蛋白。在单侧肾脏切除高盐+p38抑制剂组中,注射p38抑制剂后,尿蛋白明显低于单侧肾脏切除高盐组。在单侧肾脏切除高盐组小鼠中,脾脏组织的IL-13明显高于单侧肾脏切除模型对照组,而NFAT5的表达无明显区别。脾脏和骨髓单个核细胞在高盐培养后,NFAT5和IL-13的表达明显高于对照组,加入p38抑制剂(SB202190)后,表达水平下调。提示在处于疾病状态时,予高盐刺激后,产生的蛋白尿可能与p38蛋白激酶活化后NFAT5、IL-13的表达有关。
【关键词】：单侧肾脏切除 尿蛋白 p38抑制剂 高盐 NFAT5 IL-13
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 第一部分 从体内实验探讨p38 蛋白激酶在高盐诱导蛋白尿中的作用及其分子机制12-31
• 引言12
• 一、材料和方法12-24
• 二、结果24-27
• 三、讨论27-30
• 四、小结30-31
• 第二部分 从体外实验探讨p38 蛋白激酶在高盐诱导蛋白尿中的作用及其分子机制31-45
• 引言31
• 一、材料和方法31-39
• 二、结果39-43
• 三、讨论43-44
• 四、小结44-45
• 总结论45-46
• 参考文献46-49
• 综述49-55
• 参考文献52-55
• 致谢55

【共引文献】

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1 时凯锋;戴飞;王昕;蔡浔远;徐友妹;;白细胞介素-13与肾脏疾病的研究近况[J];中国中西医结合肾病杂志;2006年04期

2 蔡浔远;戴飞;时凯峰;王昕;;益肾化瘀泄浊法调节慢性肾衰竭患者血清IL-13的临床研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2006年12期

3 李小会;;白细胞介素-13与肾脏疾病[J];中国中西医结合肾病杂志;2009年02期

4 刘海燕,唐德q，

本文编号：324009