PINK1/Parkin介导线粒体自噬改善线粒体功能减轻白蛋白所致肾小管上皮细胞损伤

发布时间：2021-06-26 02:46

　　【目的】尿蛋白是加速慢性肾脏病进展的重要驱动因素。白蛋白是尿蛋白的主要成分,可通过多种机制诱导肾小管上皮细胞损伤。线粒体损伤和功能障碍是白蛋白诱导肾小管上皮细胞损伤的重要原因之一。线粒体自噬能选择性地清除功能失调或受损的线粒体,在维持线粒体稳态中具有重要作用。我们前期的研究表明,白蛋白超负荷通过PINK1/Parkin通路增强了近端肾小管上皮细胞中的线粒体自噬,然而增强的线粒体自噬在白蛋白超负荷模型中的具体作用目前仍不清楚。因此,本研究应用Parkin siRNA和Parkin过表达质粒转染的方法对白蛋白超负荷模型中的线粒体自噬进行调控,检测人近端肾小管上皮细胞中线粒体功能、氧化应激水平及细胞损伤的变化,进一步探索PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬在白蛋白超负荷所致近端肾小管上皮细胞损伤中的作用及机制。【方法】（1）研究对象:人近端肾小管上皮细胞（HK-2）。（2）尿白蛋白超负荷模型:用人血清白蛋白（8mg/ml）处理体外培养的HK-2细胞8h。（3）siRNA转染及分组:应用Parkin siRNA转染干预线粒体自噬,设置对照组（Ctrl）、白蛋白组（ALB）、阴性对照si... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ParkinsiRNA转染后白蛋白超负荷模型中线粒体溶酶体共定位的变化

图2 Parkin过表达质粒转染后白蛋白超负荷模型中线粒体溶酶体共定位的变化注： Ctrl：对照组；ALB：白蛋白组；Vehi +ALB：empty vector+白蛋白组；Parkin+ALB：Parkin 过表达质粒+白蛋白组2.1.2 通过免疫印迹技术检测 Parkin siRNA 转染及 Parkin 过表达质粒转染后白蛋白超负荷模型中线粒体自噬的变化为了进一步证实荧光探针双染所见，我们通过免疫印迹技术检测各组 HK-2细胞中线粒体自噬关键调节蛋白 Pink1 和 Parkin 及自噬标记蛋白 LC3-II 和 p62的表达情况。图 3 的结果表明：①与对照组相比，白蛋白组和 scrambled siRNA+白蛋白组中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表达水平显著增加，p62 的表达水平显著减少，差异均具有统计学意义（P<0.05）；②白蛋白组与 scrambled siRNA+白蛋白组比较，Pink1、Parkin、LC3-II 和 p62 的表达水平无明显变化（P>0.05）；③与 scrambled siRNA+白蛋白组相比，Parkin siRNA+白蛋白组的 HK-2 细胞中Parkin 蛋白的表达水平显著降低，Pink1 和 LC3-II 的表达水平也显著降低，并且p62 的表达水平显著增加，差异均具有统计学意义（P<0.05）。此外，图 4 的结果表明：①与对照组相比，白蛋白组和 empty vector+白蛋

天津医科大学硕士学位论文白组中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表达水平均显著增加，p62 的表达水平均显著减少，差异均具有统计学意义（P<0.05）；②白蛋白组与 empty vector+白蛋白组比较，Pink1、Parkin、LC3-II 和 p62 的表达水平均无明显变化（P>0.05）；③与empty vector+白蛋白组相比，Parkin 过表达质粒+白蛋白组的 HK-2 细胞中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表达水平均显著增加，p62 的表达水平显著减低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。以上这些结果表明，Pink1/Parkin 通路参与了白蛋白超负荷模型中线粒体自噬的激活，Parkin siRNA 转染可抑制白蛋白超负荷模型中线粒体自噬的激活，而 Parkin 过表达质粒转染增强了白蛋白超负荷模型中线粒体自噬的激活。


本文编号：3250472