吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4-TRAF6通路的影响及机制研究
本文关键词:吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4-TRAF6通路的影响及机制研究,,由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】:目的:1、检测糖尿病(diabetic)大鼠肾组织中TLR4(Toll-like receptor4)、TRAF6(TNF receptor-associated factor6,TRAF6)的表达情况;2、探讨吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4-TRAF6表达的影响及可能机制。方法:选取58只5周龄(体重约180g-200g)的无特定病原体级雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,采用随机分组的原则,分为正常对照组(A组,n=10)和造模组(n=48)。正常组给予常规饲料喂养;造模组给予高脂高糖饲料饮食,均自由饮水。4周后,检测空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)。胰岛素抵抗模型大鼠造模成功后禁食12小时后腹腔内注射STZ 35mg/kg,注射72小时后,采大鼠尾静脉血液测随机血糖(BS)连续三次≥16.7 mmol/L者确定为糖尿病大鼠(有2只未建模成功)。正常对照组注射等体积的枸椽酸缓冲液。未建模成功大鼠剔除实验组。A组予以常规饲料喂养;糖尿病SD大鼠成功建立模型后予以高脂饲料喂养,随机分为5组:未干预组(B组,n=10),吡格列酮2.5mg/kg.d(C组,n=8),吡格列酮10mg/kg·d组(D组,n=8),吡格列酮2.5mg/kg·d+TRAF6特异性抑制剂MG132 0.1mg/kg.d(E组,n=9)吡格列酮10mg/kg·d+TRAF6特异性抑制剂MG132 0.1mg/kg.d(F组,n=9),A组给予等量生理盐水灌胃,各组大鼠共干预8周。E、F组于实验第10周每日腹腔注射TRAF6特异性抑制剂MG132 0.1mg/kg.d,第12周末,各组大鼠测体重、测24h尿微量白蛋白,取血测空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、C反应蛋白、TG、TC、LDL-C水平之后,解剖并取出大鼠双侧肾脏,分别用Real-time PCR法测糖尿病大鼠模型肾组织中TRAF6的m RNA表达水平,HE和免疫组织化学两种方法进行染色,光镜下观察肾组织形态学及TLR4、TRAF6、NF-κB的蛋白表达。结果:(1)、4周末大鼠体重、生化:与A组比较,造模组体重比正常组增加,差异具有统计学意义(P0.05);胰岛素、血糖、HOMA-IR、TG、TC、LDL较正常组升高,差异有统计学意义(P0.05)。(2)、12周末大鼠体重、生化:B组与药物及抑制剂干预组C、D、E、F组体重低于A组,差异有统计学意义(P0.05);与A组比较:其余各组大鼠24h尿微量蛋白、SCr、BUN、TG、TC、LDL-C指标及TLR4、TRAF6、NF-κB表达均增加,差异有统计学意义(P0.05);与B组相比:C、D、E、F组上述各指标表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);D组与C组比较,各项指标下降,差异有统计学意义(P0.05);E组与C组、F组与D组相比较,TLR4表达不受影响,但其他各项检测指标均下降,差异有统计学差异(P0.05);F组与E组比较,肾组织TRAF6、NF-κB的表达增加,TLR4表达无统计学差异(P0.05)。(3)、Pearson相关性分析显示糖尿病大鼠肾组织TRAF6的表达与TLR4呈负相关(r=-0.912,R2=0.749 P0.05);TRAF6与NF-κB的表达呈正相关(r=0.931,R2=0.946 P0.05);而TLR4与NF-κB呈负相关(r=-0.975,R2=0.783 P0.05)。结论:1.高糖高脂饮食联合STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏组织中TLR4、TRAF6、NF-κB表达明显增加。2.吡格列酮可能通过调控糖尿病大鼠肾组织TLR4的表达,下调TRAF6的表达,进而抑制下游炎症因子NF-κB的表达,从而减轻肾组织的炎症反应,保护糖尿病大鼠肾脏组织。
【关键词】:糖尿病肾脏病变 吡格列酮 TLR4、TRAF6、NF-κB SD大鼠
【学位授予单位】:南华大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R587.2;R692.9
【目录】:
- 主要缩语及英文索引4-6
- 摘要6-9
- Abstract9-16
- 第1章 前言16-18
- 第2章 材料与方法18-29
- 2.1 实验材料18-21
- 2.1.1 实验对象18
- 2.1.2 实验饲料18
- 2.1.3 实验主要药品及试剂18-20
- 2.1.4 主要的实验设备20-21
- 2.2 实验方法21-27
- 2.2.1 糖尿病模型建立及判定21
- 2.2.2 动物分组及饲养21-22
- 2.2.3 标本的采集与处理22-23
- 2.2.4 大鼠尿液及血生化指标的采集与测定23
- 2.2.5 大鼠肾组织HE染色23-24
- 2.2.6 免疫组织化学法检测TLR4、TRAF6、NF-κB24-25
- 2.2.7 RT-PCR法检测TRAF6 m RNA的表达25-27
- 2.3 结果判定27
- 2.4 统计学处理27-29
- 第3章 结果29-51
- 3.1 六组大鼠一般情况29-30
- 3.2 大鼠体重及血生化检测指标30-38
- 3.2.1 4 周后大鼠体重、血糖、胰岛素、HOMA-IR水平30-33
- 3.2.2 12周末六组大鼠体重、血脂水平的变化33-35
- 3.2.3 12周末六组大鼠血肌酐、24h尿微量白蛋白、血尿素氮、C反应蛋白水平的变化35-38
- 3.3 六组大鼠肾组织病理检查38-39
- 3.4 大鼠肾脏组织免疫组化结果39-48
- 3.4.1 各组大鼠肾脏组织TLR4免疫组化结果39-41
- 3.4.2 TRAF6免疫组化结果41-43
- 3.4.3 NF-κB免疫组化结果43-45
- 3.4.4 TLR4、TRAF6、 NF-κB 免疫组化蛋白表达相关性分析45-48
- 3.5 大鼠肾脏组织中TRAF6 m RNA的表达情况48-51
- 第4章 讨论51-58
- 4.1 构建糖尿大鼠肾损害模型51-52
- 4.2 糖尿病肾病与炎症免疫52
- 4.3 TLR4/NF-κB信号通路及TRAF6在糖尿病肾病的作用52-55
- 4.4 吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织并发症及TLR4 TRAF6通路的影响55-58
- 第5章 结论58-60
- 参考文献60-64
- 综述64-70
- 参考文献68-70
- 作者攻读学位期间的科研成果70-71
- 致谢71
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本文关键词:吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4-TRAF6通路的影响及机制研究,由笔耕文化传播整理发布。
本文编号:325922
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