缺血后处理减轻线粒体氧化应激对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护机制

发布时间：2021-07-03 02:25

　　临床和动物实验表明，缺血预处理（Ischemic Preconditioning，IPC）能够延迟和减轻再灌注损伤。IPC指在器官持续缺血损伤之前预先给予器官短暂缺血处理的人工干预。虽然IPC具有帮助器官抵抗缺血再灌注损伤的能力，却没有在临床治疗上得到应用，因为IPC必须在器官缺血之前进行干预。在大多数情况下人们无法预测缺血损伤的发生时间。在此基础上，近年研究发现一种新的治疗策略—缺血后处理（Ischemic Postconditioning, POC）,即缺血后持续再灌注前，给予多次短暂再灌注/缺血处理,可减轻再灌注损伤。由于POC可以在缺血发生后应用,可行性和可预见性好，因此具有很好的临床应用前景。但目前对POC保护作用机制尚不清楚，而使其临床应用受到限制。本研究通过大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型来研究POC的保护作用机制。首先，本实验成功制备了大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型，I/R（ischemia reperfusion）组大鼠肾脏血清肌酐浓度大幅度提高，切片染色观察发现组织学结构异常，表现出肾小管上皮细胞肿胀、细胞空泡变性，管腔狭窄等急性肾损伤病变。其次，通过对肾脏细胞中ROS的产生... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：146 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
内容提要
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第一篇 前言
第二篇 文献综述
    第一章 肾脏缺血再灌注损伤的研究概况
    第二章 缺血再灌注损伤机制的研究
        2.1 ROS 的产生
            2.1.1 黄嘌呤氧化酶
            2.1.2 线粒体
            2.1.3 中性粒细胞
        2.2 氧化应激造成组织损伤的机制
            2.2.1 脂质过氧化反应
            2.2.2 线粒体
            2.2.3 细胞凋亡
    第三章 缺血再灌注损伤的防治方法
        3.1 缺血预处理
        3.2 缺血后处理
        3.3 抗氧化剂
            3.3.1 谷胱甘肽
            3.3.2 过氧化物歧化酶
            3.3.3 热休克蛋白
        3.4 细胞疗法
    第四章 缺血后处理的保护作用机制
        4.1 活性氧簇和钙超载
        4.2 RISK 途径
        4.3 ATP 敏感性钾通道和线粒体通透性转换孔
第三篇 实验研究
    第一章 动物模型的制备及 POC 对肾脏的保护作用
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验仪器
            1.1.3 实验试剂
            1.1.4 器械耗材
        1.2 实验方法
            1.2.1 动物模型的制备
            1.2.2 绘制各组动物模型生存曲线
            1.2.3 肾脏功能学检测
            1.2.4 组织包埋与切片
            1.2.5 肾脏组织 HE 染色
        1.3 实验结果
            1.3.1 动物模型的制备及 POC 的优化
            1.3.2 肾脏组织学改变
            1.3.3 血清肌酐的检测
            1.3.4 各组动物模型的生存曲线
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第二章 缺血后处理对线粒体的保护作用
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验仪器
            2.1.2 实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 免疫组织化学法检测肾脏组织中抗原的表达
            2.2.2 Western Blot 检测肾脏组织中蛋白的表达
            2.2.3 肾脏组织线粒体膜势能的测定
            2.2.4 DCFDA 检测原位 ROS 的产生
        2.3 实验结果
            2.3.1 免疫组织化学技术肾脏组织中 Caspase-3 的表达
            2.3.2 Western Blot 检测肾脏组织中 Caspase-3 的表达
            2.3.3 线粒体膜势能的检测
            2.3.4 免疫组织化学技术检测肾脏组织中 8-OhDG 的表达
            2.3.5 DCFDA 原位检测 ROS 的生成
            2.3.6 免疫组织化学技术检测 Nitrotyrosine 的表达
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 缺血后处理对肾脏的保护作用的机制
        3.1 实验材料
            3.1.1 实验仪器
            3.1.2 实验试剂
        3.2 实验方法
            3.2.1 TUNEL 检测肾脏中的细胞凋亡
            3.2.2 荧光双染检测 8-OHDG 与 TUNEL
            3.2.3 荧光双染检测 Kir6.2 与 VDAC
            3.2.4 Western Blot 检测 Kir6.2
        3.3 实验结果
            3.3.1 TUNEL 检测肾脏中的细胞凋亡
            3.3.2 荧光双染检测 8-OhDG 与 TUNEL
            3.3.3 荧光双染检测 Kir6.2 与 VDAC
            3.3.4 Western Blot 检测组织 Kir6.2 表达
        3.4 讨论
        3.5 小结
第四篇 结论
课题创新性总结
参考文献
在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Protective effect of curcumin against liver warm ischemia/reperfusion injury in rat model is associated with regulation of heat shock protein and antioxidant enzymes[J]. Shi-Qiang Shen, Yuan Zhang, Cheng-Long Xiong, Department of General Surgery, Renmin Hospital of Wuhan University, 238 Jiefang Road, Wuhan 430060, Hubei Province, China Jin-Jian Xiang, Department of Hepatobiliary Surgery, Xiamen First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Xiamen 361004, Fujian Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2007(13)
[2]Intravenous administration of glutathione protects parenchymal and non-parenchymal liver cells against reperfusion injury following rat liver transplantation[J]. RolfJ.Schauer,SinanKalmuk,Alexander L.Gerbes,Rosemarie Leiderer,Herbert Meissner,Friedrich W.Schildberg,Konrad Messmer,Manfred Bilzer.  World Journal of Gastroenterology. 2004(06)



本文编号：3261674