酒精通过miR-299a-5p/NFκB1/IL轴抑制睾丸间质祖细胞雄激素合成的分子机制

发布时间：2021-07-04 10:15

　　目的:分析并阐明酒精对原代睾丸间质祖细胞（PLC）雄激素合成的调控机制,为日后临床诊断和治疗免疫相关及酒精作用导致的男性性腺机能低下、生殖障碍及睾酮缺乏等疾病提供新的靶标和治疗方法。方法:首先以不同浓度的酒精分别处理PLC,然后通过分子生物学及放射性酶联免疫方法（RIA）检测PLC中雄激素合成酶的表达量及雄激素产量。然后,利用RT-PCR方法,分析PLC中miR-299a-5p的表达量。其次,利用转录组测序的方法（RNA-Seq）从基因表达水平上分析抑制miR-299a-5p的表达对不同发育阶段LC雄激素合成及其调控具体靶标。使用免疫沉淀方法（CO-IP）结合信息学方法,分析miR-299a-5p及其调控靶标NFκB1介导的信号通路。最后,以长效miR-299a-5p抑制剂进行睾丸内局部注射,从动物实验验证该miRNA调控PLC雄激素的合成功能。结果:RIA测定结果显示,终浓度为30μM,120μM和480μM酒精可使PLC合成孕酮的产量分别为4.62±0.13,3.56±0.41及0.91±0.43 ng/106细胞,与对照组相比,分别下降了26.4%,42.6%和85%。RT-PC... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同发育阶段LC及其雄激素合成过程

图1.1不同发育阶段LC及其雄激素合成过程ubstrates,products and gene expression of Key Enzymes from androgen synthedifferent developmental stages示实际合成激素通路，绿色虚线表示不能合成激素通路，红色框内表示在LC中都表达的雄激素合成酶）

图1.3野生型及IGF-1敲除老鼠生殖系统大小的比较mparison of reproductive system size between wild type and IGF-1 k（左边: 野生型；右边：IGF-1敲除）长因子 3（INSL-3）是 LC 增殖分化的标志性蛋白，可标映 LC 的功能状况[46]，对 LC 雄激素合成以及精子发生都SL-3 蛋白的表达量是随着 LC 谱系的发育以及 LC 数量的INSL-3 在 LC 中为组成型表达，不受 cAMP 等多种内外源 INSL-3 会导致隐睾、骨质疏松及精子发育不良[49-51]。胰进 LC 增殖和 LHCGR 的表达[52, 53]。转基因小鼠模型结果质干细胞的数量，但抑制其增殖和分化，最终导致动物睾血清睾酮水平低下[52, 53]。

【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠睾丸Leydig细胞的培养和鉴定[J]. 刘建中,郭海彬,邓春华,欧咏虹,彭爱萍.  中华男科学杂志. 2006(01)
[2]睾丸Leydig细胞干细胞研究进展[J]. 张思孝,董强.  中华男科学杂志. 2005(11)
[3]酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究[J]. 刘长云,杨利丽,杜玉华,卢映,张培森,王永芹,童祥华,张志清,孙思禄.  潍坊医学院学报. 2000(04)
[4]酒精对男性生殖的影响[J]. 孟东升,刘志中.  男性学杂志. 1991(03)

博士论文
[1]小鼠卵泡发育过程中MiRNA-383和MiRNA-320的功能研究[D]. 阴棉棉.中国科学技术大学 2013



本文编号：3264601