长链非编码RNA lnc-TSI通过负向调节TGF-β/Smad3信号通路抑制肾脏纤维化

发布时间：2021-07-07 08:49

　　研究背景慢性肾脏病已成为全世界“公共健康问题”。2010年,全球约260万尿毒症患者因肾功能丧失而需依赖透析或者肾移植来维持生命,约230万到710万名患者因无条件接受透析或肾移植治疗而过早死亡。因此,任何能够防止或延缓慢性肾脏病发展至尿毒症的策略都具有极其重要的社会和经济意义,发现干预肾纤维化的新靶点是创建临床防治慢性肾脏病策略的第一步。肾脏纤维化是各种进展性肾脏病发展为终末期肾衰竭的共同通路。TGF-β被认为是致肾脏纤维化最重要最强烈的诱导因子之一,在多种肾脏细胞中都具有促纤维化的作用,包括肾小管上皮细胞。TGF-β首先与TGF-β Ⅱ型受体（TβRⅡ）结合,TβRⅡ磷酸化TGF-β Ⅰ型受体（TβRI）,活化的TβRI可以招募并磷酸化Smad2和Smad3,磷酸化的Smad2和Smad3与Smad4结合并共同进入细胞核,在细胞核内调控促纤维化基因的转录,Smad3蛋白的磷酸化过程被认为是整个通路的核心环节。既往关于肾脏纤维化的研究主要集中于关键蛋白的编码基因上,即传统的关键基因突变导致其编码的蛋白发生改变进而引起生物学功能的异常。然而,随着分子生物学机制研究的深入,人们发现表观遗... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－３小干扰ＲＮＡ敲降候选ＩｎｃＲＮＡｓ后观察ＴＧＦ－ｐｉ所致的促纤维化基因的表达??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ??

??的蛋白表达，敲降／ｎｃ－ｒａ／的效率如图２－１?Ａ所示。我们将／ｎｃ－ｒｓ／的ｓｉＲＮＡ序列??克隆至ｐＬＶ３／Ｈｌ／ＧＦＰ＋Ｐｕｒｏ载体上包装慢病毒后感染ＨＫ２和ＨＫＣ８细胞，结果??显示两种ｓｈＲＮＡ慢病毒可以有效降低／／７ｃ－；Ｔ５／的表达水平（Ｐ＜０．００１）（图２－１??Ｂ＆Ｃ）。我们检测敲降／／？〇７＂５７后对促纤维化基因表达的影卩向，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ显不??在ＴＧＦ－ｐｌ作用下，相比较于敲降阴性对照组，ＣＯＬ?Ｉ、ａＳＭＡ及ＳＮＡＩＬ的蛋??白水平明显升高（Ｐ＜０．０１）（图２－１?Ｄ），与之前的结果一致。这些结果表明／ｒｔｃ－７＾／??可以抑制ＴＧＦ－ｐｉ所致的促纤维化基因的表达。??Ａ?Ｂ?Ｃ??ＰＢＳ?ＭＴＧＦ－ｐｌ?ＰＢＳ?ＢＢＴＧＦ－ｐｌ?ＰＢＳ?？ｉＴＧＦ－ｐｉ??＾?Ｐ＜００Ｑ１?ｙ，?＾－〇〇〇１?＾??ｐ．０００１?ＥＨ２２１?ｐｉ?—１〇ｌ?Ｐ＜０００１??ｆｐＢ－?ｉ＼?ｔｉｌ８－?ｉ?齋严??ｉｌｌ６－１?ｉｐ６－１?ｉ°ｉ６－?ｉ??ｇ－Ｊ?Ｉ?４－?Ｊ?Ｘ?ｖｌｌ?４－?ｇ－１?０?４－??ｉｉｉ：ｌｉｔｌ?！ｉｉ：ｌｌｌｌ?ｍｉｌｉｉ??＃ｖ°?／／??Ｄ?ｃ，?＾?

在过表达／？ｃ－７３／的细胞中，细胞核中的绿色荧光明显较弱，主要的??绿色荧光信号仍然处于细胞质中；而用两条ｓｉＲＮＡ分别敲降／ａ７ｃ－；Ｔ５７的细胞中，??代表Ｓｍａｄ３的绿色荧光信号则几乎全部位于细胞核内（图２－５）。??ＰＢＳ??ＴＧＦ－｜３１（２ｈ）???－?ｖｅｃｔｏｒ?ｌｎｃ－ＴＳ?Ｉ?ｓｉＮＣ?ｓｉｌｎｃ－７ＳＩ－１?ｓ＼＼ｎｃ－ＴＳ＼－２??图２－５免疫荧光显示ｈｃ－ｒｓ／可以抑制ＴＧＦ－ｐｉ所致的Ｓｍａｄ３核转位??Ｆｉｇ．?２－５?Ｃｏｆｏｃａｌ?ｉｍａｇｅｓ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈａｔ?Ｉｎｃ－ＴＳＩ?ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ?ＴＧＦ－ｐｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ?ｏｆ??Ｓｍａｄ３??荧光共聚焦显微镜拍照显示过表达／？ｃ－；Ｔ５７可以抑制ＴＧＦ－（３ｌ所致的Ｓｍａｄ３??的核转位，而敲降／ｎｃ－７１Ｓ／可以增强ＴＧＦ－ｐｉ所致的Ｓｍａｄ３的核转位。Ａｃｔｉｎ??ｆｉｌａｍｅｎｔｓ：肌动蛋白微丝。ＤＡＰＩ：?４’，６－二脒基－２－苯基卩引口朵。??５４??


本文编号：3269331