双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞UCHL1基因表达的调控机制研究

发布时间：2017-04-26 13:04

  本文关键词：双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞UCHL1基因表达的调控机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究双氢青蒿素对人前列腺癌PC-3细胞株中抑癌基因UCHL1表达的影响,并探讨其可能的调节机制。方法：PC-3细胞经不同浓度(25、50和100μmol/L)的DHA处理48 h后,并设空白对照组。采用FCM法检测各组细胞的凋亡率和细胞周期变化。采用免疫荧光染色法检测UCHL1和DNA甲基化转移酶1(DNAmethyltransferase 1,DNMT1)蛋白在细胞内的定位及表达量。蛋白质印迹法检测UCHL、DNMT1、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)和Akt蛋白的表达；并且以1 pmol/L磷酸肌醇-3激酶(phosphoin-ositide 3-kinase, PI3K)家族抑制剂Wortmanin作为阳性对照,比较DHA处理组p-Akt蛋白的表达量。结果：DHA能明显诱导PC-3细胞凋亡,并使细胞停滞在G2/M期,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。DHA处理组中DNMT1蛋白由细胞核转到细胞质,与空白对照组比较,DNMT1蛋白在细胞核与细胞质中总的表达水平明显下调(P0.05)；而UCHL1蛋白表达在细胞质内明显上调(P0.05)。与空白对照组比较,DHA处理组与阳性对照组中UCHL1蛋白表达均上调,DNMT1表达水平均下降(均P0.05),p-Akt蛋白表达下调(P0.05,而Akt蛋白表达量无明显变化(P0.05)；其中,高浓度DHA处理组中p-Akt蛋白表达下调更为显著,更接近于阳性对照组。结论：DHA能够抑制DNMT1的表达,恢复UCHL1抑癌基因表达,诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,阻滞细胞周期进程,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的活性有关。
【关键词】：前列腺肿瘤 双氢青蒿素 DNA(胞嘧啶-5-)-甲基转移酶 癌基因蛋白质akt 泛素羧基末端水解酶1
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 参考文献13-14
• 1 材料与方法14-15
• 1.1 细胞系14
• 1.2 主要试剂14
• 1.3 主要仪器14-15
• 1.4 药物的配制15
• 2 实验方法15-21
• 2.1 细胞培养15
• 2.2 PC-3细胞药物处理及分组15-16
• 2.3 细胞收集16
• 2.4 FCM法检测细胞凋亡率16
• 2.5 流式细胞仪检测细胞周期16-17
• 2.6 细胞免疫荧光染色法检测UCHL1和DNMT1蛋白17-18
• 2.7 蛋白质印迹法检测UCHL1、DNMT1、p-Akt和Akt蛋白18-20
• 2.8 统计学方法20-21
• 3 结果21-27
• 3.1 DHA诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡21
• 3.2 DHA诱导前列腺癌PC-3细胞发生G2/M期阻滞21-22
• 3.3 DHA作用后前列腺癌PC-3细胞内UCHL1和DNMT1蛋白的定位及表达22-25
• 3.4 DHA作用后前列腺癌PC-3细胞中Akt信号通路相关蛋白的表达25-27
• 4. 讨论27-31
• 4.1 目前临床治疗前列腺癌的方法27
• 4.2 DHA对人前列腺癌PC-3细胞的影响27-28
• 4.3 在前列腺癌PC-3细胞株中DNMT1是UCHL1抑癌基因表达的关键点28
• 4.4 DHA抑制DNMT1表达恢复UCHL1的抑癌作用与P13K/Akt通路有关28-31
• 5 附图及说明31-33
• 全文总结33-34
• 参考文献34-36
• 文献综述36-43
• 参考文献41-43
• 致谢43-44
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录44

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