巨噬细胞对前列腺癌细胞株PC-3作用及机制的探讨

发布时间：2017-04-26 19:15

  本文关键词：巨噬细胞对前列腺癌细胞株PC-3作用及机制的探讨，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究巨噬细胞对人的前列腺癌细胞(PC-3)的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其对前列腺癌血管形成的作用,并探讨其中的机制。方法:CD14+免疫磁珠法分选人外周血中的单核细胞,加入M-CSF(50ng/ml)诱导7天后将单核细胞转变为巨噬细胞,然后将其极化为四个亚型;其中,加入无FBS的RPMI1640培养基诱导48h的巨噬细胞M0亚型,加入LPS(100ng/ml)和IFN-γ(100 ng/ml)共同刺激诱导过夜的巨噬细胞M1亚型,加入IL-4(20 ng/ml)刺激过夜的的巨噬细胞M2亚型,而在含有50%的PC-3条件培养基中培养诱导7天的单核细胞将会极化为TAM亚型,高内涵细胞成像分析系统检测四种巨噬细胞亚型表面标志CD14/CD163表达水平的差异;荧光定量PCR检测四种巨噬细胞亚型中IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IL-23、CXCL9、CCL13以及let-7家族的m RNA的相对表达水平;ELISA酶联免疫法检测四种巨噬细胞亚型的上清液中TGF-β、TNF-α、IL-10、IL-12的表达水平;MTT法检测四种巨噬细胞亚型对前列腺癌细胞PC-3增殖的作用差异;凋亡试剂盒检测四种巨噬细胞亚型对前列腺癌细胞PC-3凋亡的影响;划痕实验法和Transwell小室法检测四种巨噬细胞亚型对前列腺癌细胞PC-3迁移和侵袭的影响;体外血管形成实验检测四种巨噬细胞亚型对前列腺癌细胞PC-3血管生成的影响。结果:在四种亚型的巨噬细胞中,实时PCR检测到细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、IL-23与CXCL9在M1亚型中的m RNA表达水平显著高于M0、M2和TAM亚型,而IL-10在M2亚型及TAM亚型中的m RNA表达水平显著高于M0和M1亚型,CCL13在M2亚型中的m RNA表达量明显高于其他三种亚型;ELISA酶联免疫法检测到IL-10与IL-12在四种亚型上清液中的表达趋势和实时PCR的结果是一致的,TGF-β在TAM亚型上清液中是显著高于其他三种亚型的,而TNF-α则是在M1亚型的上清液中表达水平最高;另外,荧光定量PCR还检测到let-7家族中,m RNA的表达差异倍数最显著的三个亚型分别是let-7b、let-7c和let-7g-5bp,其中let-7b和let-7c在TAM亚型中的m RNA的表达水平明显高于其他三种亚型,而let-7g-5bp的m RNA的表达水平在M2亚型中是明显升高的;M0和M1亚型的巨噬细胞能够抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖,M2和TAM亚型则能够明显促进PC-3细胞的增殖;四种亚型的巨噬细胞对PC-3细胞的凋亡作用并没有显著的差异;M2和TAM亚型能显著促进PC-3细胞的迁移和侵袭能力,以及促进前列腺癌的血管生成。结论:M1亚型的巨噬细胞能够抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖;M2亚型和TAM亚型能够促进PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭以及前列腺癌的血管形成能力;其作用机制可能与不同亚型巨噬细胞的细胞因子表达谱相关;micro RNA let-7家族中let-7b与let-7g-5bp的差异表达可能会调控巨噬细胞的极化状态,抑制M1亚型转变,促进细胞向M2亚型极化。
【关键词】：巨噬细胞 PC-3细胞 细胞因子 微小RNA let-7
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料与方法13-24
• 2.1 实验细胞株13
• 2.2 主要材料与试剂13-14
• 2.3 实验主要仪器和设备14
• 2.4 主要试剂的配制14-15
• 2.5 实验方法15-23
• 2.5.1 免疫磁珠法分离血液中单核细胞15-16
• 2.5.2 巨噬细胞的获取及极化16
• 2.5.3 PC-3 和HUEVC的体外培养16-17
• 2.5.4 条件培养基的制备：17
• 2.5.5 荧光定量PCR分析巨噬细胞中相关细胞因子、趋化因子和micro RNA let-7 家族m RNA的相对表达水平17-20
• 2.5.6 ELISA法检测细胞因子20-21
• 2.5.7 MTT检测21
• 2.5.8 细胞凋亡率的检测21-22
• 2.5.9 划痕实验22
• 2.5.10 Transwell侵袭实验22-23
• 2.5.11体外血管生成实验23
• 2.6 数据处理23-24
• 第3章 结果24-43
• 3.1 巨噬细胞亚型的形态学观察及鉴定24-26
• 3.2 四种亚型的巨噬细胞对PC-3 细胞的影响26-34
• 3.2.1 四种亚型的巨噬细胞对PC-3 细胞增殖的影响26-27
• 3.2.2 四种亚型的巨噬细胞对PC-3 细胞凋亡的影响27-29
• 3.2.3 四种亚型的巨噬细胞对PC-3 细胞迁移的影响29-30
• 3.2.4 四种亚型的巨噬细胞对PC-3 细胞侵袭力的影响30-32
• 3.2.5 四种亚型的巨噬细胞对PC-3 细胞血管形成的影响32-34
• 3.3 四种亚型的巨噬细胞中相关的细胞因子、趋化因子以及micro RNAlet-7 家族表达水平的测定34-43
• 3.3.1 四种亚型的巨噬细胞中细胞因子表达水平的检测34-39
• 3.3.2 四种亚型的巨噬细胞中趋化因子表达水平的检测39-40
• 3.3.3 四种亚型的巨噬细胞中micro RNA let-7 家族表达水平的检测40-43
• 第4章 讨论43-48
• 第5章 结论48-49
• 致谢49-50
• 参考文献50-54
• 综述54-62
• 参考文献59-62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 林帅;代志军;包兴;王西京;;巨噬细胞在肿瘤发生发展中的作用及机制[J];国际外科学杂志;2012年12期

2 彭晔;张旭刚;郑运田;王艳玲;胡洁;;白细胞介素6与恶性肿瘤关系的临床研究进展[J];临床荟萃;2012年14期

3 张磊;孙圣坤;史立新;张旭;;前列腺癌与良性前列腺增生患者血清细胞因子差异的蛋白质组学研究[J];中华男科学杂志;2010年07期

4 王亮;张薇;;肿瘤相关巨噬细胞的研究进展及靶向免疫治疗[J];中国全科医学;2010年20期

5 ;An effective vaccine against colon cancer in mice:Use of recombinant adenovirus interleukin-12 transduced dendritic cells[J];World Journal of Gastroenterology;2008年04期

6 陈福将;李昌崇;罗运春;陈小芳;;毛细支气管炎患儿血清MCP-4、MDC和IL-4水平及临床意义[J];临床儿科杂志;2007年05期

7 郭双平;王文亮;李擒龙;;肿瘤相关性巨噬细胞与胃癌浸润和转移的关系[J];临床与实验病理学杂志;2007年02期

8 路慧丽;俞眉;韩伟;;趋化因子CXCL9/Mig的研究进展[J];中国生物工程杂志;2006年10期

9 尹华华,朱京慈,李磊;巨噬细胞的异质性[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年04期

10 于一,郭艳茹,孟繁菁,岳旭;巨噬细胞在激活过程中形态和功能的改变[J];解剖学杂志;1988年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 包世新;白细胞介素-6与前列腺癌相互关系的实验研究[D];华中科技大学;2010年

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