自噬在低氧诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

发布时间：2021-07-30 21:18

　　背景:急性肾损伤是重症患者最常见、具有高死亡风险的急危重症。缺血性肾损伤是急性肾损伤的常见病因,各种原因导致机体有效循环血量急剧下降、肾脏低灌注,即肾组织细胞缺血缺氧,均能导致肾小管细胞损伤,增加细胞凋亡。在能量缺乏或缺氧的压力下,自噬启动维持细胞内稳态,然而,自噬是否参与缺血性急性肾损伤中肾小管上皮细胞凋亡尚不清楚。本文主要通过研究低氧诱导的人肾小管上皮细胞株（HK2细胞）,探讨自噬与凋亡之间的关系,以进一步阐明自噬在缺血性肾小管上皮细胞损伤中的作用。方法:本研究主要采用HK2细胞构建的缺氧模型,Western Blot检测HK2细胞自噬相关蛋白Beclin1,LC3II/LC3I,P62,Lamp2,TFEB,mTORC1和凋亡相关蛋白cleaved-caspase3表达水平,流式细胞仪检测HK2细胞凋亡情况;并采用qPCR检测P62转录水平的变化,加用蛋白酶体抑制剂MG132阻断泛素蛋白酶体降解途径后,观察低氧诱导的P62蛋白水平的变化;采用低氧诱导稳定表达GFP-LC3的HK2细胞18h,荧光显微镜观察GFP-LC3斑点和P62变化,电镜观察自噬小体变化;进一步采用低氧联合自噬... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

AKI的RIFLE标准

图 1.AKI 的 RIFLE 标准。（摘自 JAKellum et al. 2012[1]）Figure 1. The RIPLE standard of AKI.( JA Kellum et al. 2012[1])性肾损伤是急性肾损伤的常见病因，各种原因如脓毒症、创伤种因素均可导致机体有效循环血量急剧下降，肾脏低灌注，即氧，导致肾小管细胞损伤[7]。研究显示，在缺血性急性肾损伤病刷状缘消失，管状细胞不规则，近端小管扩张，肾小管上皮细血性急性肾损伤的最重要发病机制之一[8]。研究表明，缺氧是缺病理生理过程，可诱导肾小管上皮细胞凋亡，其机制可能与低内线粒体功能缺陷有关[9]。是细胞在能量缺乏或缺氧的应激压力下出现的一种通过溶酶体细胞器、蛋白质及其他大分子物质，维持细胞内稳态的生理过小体、自噬小体与溶酶体融合及自噬溶酶体降解过程（图 2）。

组比较采用方差分析，组内两两比较采用 LSD-t 法；检验水准 α=0.05。统计学差异。验结果氧诱导 HK2 细胞凋亡研究采用Western Blot检测细胞凋亡指标cleaved-caspase3表达，结果 cleaved-caspase3 蛋白表达呈时间依赖性增加，尤其以低氧培养 24 h 低氧 12 h 、18 h、24 h 的 cleaved-caspase3 蛋白水平分别为(0.315±0.0(0.586±0.063)、(0.698±0.085)，较对照组(0.161±0.043)相比，差异有统0.019, P=0.000, P=0.000)；低氧 18 h、24 h 组与低氧 12 h 组比较，差义(P=0.001, P=0.000)；而低氧 18 h 组与低氧 24 h 组比较，差异无统 3)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]肾缺血再灌注损伤中细胞凋亡和氧化应激[J]. 胡红林,王共先.  中国现代医学杂志. 2010(15)



本文编号：3312144