副交感神经M1受体促进前列腺癌转移并抵抗肿瘤细胞凋亡的研究

发布时间：2021-08-10 00:24

　　该文旨在探讨副交感神经M1受体（muscarinic acetylcholine M1 receptor,CHRM1）通过调节PI3K/AKT信号通路对前列腺癌增殖、转移以及肿瘤细胞凋亡影响的研究。选用Western blot、免疫荧光等方法检测CHRM1在前列腺癌细胞中表达情况。体外培养人前列腺癌细胞系PC-3、LNCaP、DU145,然后用CHRM1激动剂卡巴胆碱（CAR）及特异性抑制剂哌仑西平（PIN）处理细胞。用CHRM1 RNAi慢病毒感染细胞,构建前列腺癌CHRM1敲低的稳转株。选用CCK8细胞增殖实验、平板克隆实验、细胞迁移侵袭实验、流式细胞术检测及透射电镜观察等方法探究CHRM1在前列腺癌中增殖、转移和凋亡水平。最后,用Western blot方法检测敲低的CHRM1前列腺癌细胞中上皮间质标志物及PI3K/AKT信号表达水平。结果显示,CHRM1大量表达在前列腺癌各细胞系细胞中。CAR处理后细胞增殖能力、克隆形成水平、转移能力及抗凋亡能力提高,而PIN处理后其增殖能力、克隆形成能力、转移能力及抗凋亡能力降低。敲低CHRM1后,细胞的转移能力及抗凋亡能力降低,且电镜下出现... 

【文章来源】：中国细胞生物学学报. 2020,42(05)CSCD

【文章页数】：12 页

【部分图文】：

构建CHRM1稳定敲低的细胞系模型

为了探究CHRM1是否在人前列腺癌中促进增殖和肿瘤形成,我们首先比较了CHRM1在人前列腺癌细胞系细胞PC-3、LNCaP、DU145、正常的前列腺上皮细胞RWPE-1、非小细胞肺癌细胞系A549中蛋白表达情况,发现CHRM1在前列腺癌细胞中表达高于正常前列腺上皮细胞,而在PC-3中表达最高(图1A和图1B)。用结晶紫染色可清楚观察各种细胞的形态(图1C)。用免疫荧光的方法检测细胞核及CHRM1表达及定位情况,CHRM1大量表达在胞膜及胞质中(图1D)。以上结果提示,CHRM1在前列腺癌各细胞系中大量表达。2.2 构建CHRM1稳定敲低的细胞系模型

2.3 CHRM1激活促进前列腺癌的增殖及克隆形成能力为了研究CHRM1在调节肿瘤细胞进展过程中的作用,我们选取了CHRM1特异性拮抗剂PIN和CHRM1非选择性激动剂CAR进行接下来实验。在PC-3细胞中我们通过CCK8细胞增殖实验发现,小剂量的CAR可以促进细胞增殖(图3A),而大剂量的PIN可以抑制细胞增殖(图3B),且具有剂量依赖性和时间依赖性。最后,选择2 μmol/L CAR和200 μmol/L PIN作用24 h进行接下来实验(图3C)。同样设置对照组、激动剂组、抑制剂组进行克隆形成实验,发现激动剂组PC-3细胞克隆形成能力明显增强,而抑制剂对其克隆形成能力在很大程度上有抑制作用(图3D和图3E)。以上提示,CHRM1激活促进前列腺癌的增殖及克隆形成能力。


本文编号：3333074