磷酸钙晶体通过BMP-2/Smad和NF-κB信号通路促进血管平滑肌细胞成骨转分化

发布时间：2021-08-11 09:45

　　目的:探讨高磷诱导的磷酸钙晶体对人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）成骨转分化的作用,及其胞内信号转导通路。方法:1、高磷培养基（3 mmol/L）于37℃孵育3 d,超速离心法分离磷酸钙晶体和上清液,SEM、EDX分析晶体理化特征。HASMCs分为对照组、高磷组、晶体组和上清液组。茜素红染色、邻甲酚酞络合酮法检测钙化结节、钙含量。Western印迹检测BMP-2、RUNX2和OPN成骨蛋白表达。进一步采用PPi 10μmol/L抑制磷酸钙晶体形成,检测上述成骨蛋白表达。2、磷酸钙晶体刺激HASMCs,western印迹检测p-Smad1蛋白表达。分别用BMP-2抑制剂noggin 1μg/ml、BMP-2 shRNA和Smad1 shRNA预处理阻断BMP-2/Smad通路后,检测HASMCs成骨蛋白表达。3、磷酸钙晶体刺激HASMCs,激光共聚焦检测线粒体ROS。采用线粒体呼吸链抑制剂鱼藤酮10μmol/L处理细胞,观察线粒体ROS、钙化和成骨蛋白表达。磷酸钙晶体刺激HASMCs,western印迹检测p-IKKβ、IκBα和核p65蛋白表达。转染p65 shRNA至HASMCs,观... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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高磷培养基和对照培养基在波长650nm的OD值检测Fig1TheODvalueofhigh-Pimediumandcontrolmediumat650nm

上海交通大学医学院博士学位论文通过磷酸钙晶体促进 HASMCs 钙化酸钙晶体诱导 HASMCs 钙化结节形成图 2 所示，与对照组（图 A）相比，高磷和磷酸钙晶体孵育的 H成散在分布的钙化结节（图 B、C），而上清液孵育的 HASMCs 则形成（图 D）。

增加 HASMCs 钙含量 HASMCs 相比，高磷（36.30 7.15 g/mg 蛋白 vs 12.46±和磷酸钙晶体（35.24 2.91 g/mg 蛋白 vs 12.46±0.75 g/ HASMCs 的钙含量显著升高，但高磷组与晶体组间无统 g/mg 蛋白 vs 35.24 2.91 g/mg 蛋白，p>0.05）；上清液组含量相似（12.90 0.57 g/mg 蛋白 vs 12.46±0.75 g/mg 蛋。表 1 各组 HASMCs 钙含量的比较（ g/mg 蛋白） Comparison of calcium loads in HASMCs of each group ( g/mg prote对照组 高磷组 晶体组 上清 蛋白） 12.46±0.75 36.30 7.15* 35.24 2.91* 12.9与对照组相比，*p<0.05


本文编号：3335937