小型猪自体移植肾灌注短效Caspase-3小干扰RNA冷保存导致肾损伤加剧的机制初探

发布时间：2021-08-25 15:10

　　目的：在小型猪自体肾移植模型中探究短效Caspase-3小干扰RNA （small interfering ribonucleic acid, siRNA）在体内外研究中实验结果相悖的机制,进一步探讨短效Caspase-3siRNA对凋亡通路蛋白caspase-3活化的影响,阐明短效Caspase-3siRNA的激活固有免疫反应机制,为其临床转化提供理论依据与实验基础。方法：选择25-30kg雄性广西巴马小型猪12只,随机分为I/R组6只（I/R）,Caspase-3siRNA组6只（IR+siRNA）。建立小型猪原位自体肾移植模型,根据前期研究,左肾切取后siRNA组应用预配40ml UW器官保存液+0.3mg短效Caspase-3siRNA（合成序列5’-GGGAGACCUUCACAAACUUtt-3’与5’-AAGUUUGUGAAGGUCUCCCtg-3’）加压灌注,I/R组应用UW器官保存液同样加压灌注,冷藏24小时,移植前留取冷藏后肾脏穿刺标本,再移植到右肾原位。各组于缺血再灌注后48h切取肾脏组织标本。应用real time PCR检测各组肾脏组织中Caspase-3mRN... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图I.免疫印迹法检测两组小型猪肾组织内Toll样受体3.7的蛋白含量结果图

短效Caspase-3小千扰RNA对小型猪自体肾移植缺血再灌注损伤保护作用的探究 正文实验结果一、Toll样受体活化结果测定：免疫印迹法检测移植后48小时IR组与IR+siRNA组小型猪肾脏组织内To】】样受体3、7的蛋白水平结果如图1所示，两组小型猪肾脏组织内Toll样受体3、7的蛋白水平半定量结果比较如图2、图3所示。结果显示，移植后48小时IR+siRNA组肾脏组织内TLR-3、TLR-7蛋白水平均显著较IR组增高（p<0.01，p<0.05)。IR IR+siRNA

图3.半定量法比较两组小型猪肾组织内Toll样受体7蛋白含量结果柱(p<0.05)二、Toll样受体下游信号通路活化检测免疫印迹法检测移植后48小时IR_组与IR+siRNA组小型猪肾脏组MyD88蛋白及TRIF蛋白水平结果如图4所示，两组小型猪肾脏组织内My蛋白水平半定量结果比较如图5所示，TRIF蛋白水平半定量结果比较图6所示结果显示，移植后48小时，IR+siRMA组肾脏组织内MyD88、TRIF蛋白水平显著较IR组增高（p〈0.01，p<0.05)。IR iR+siRNAI 1 i iMyDS8


本文编号：3362350