LncRNA Gm4419通过NF-kappaB/NLRP3炎症小体信号通路调控糖尿病肾病炎症的分子机制研究

发布时间：2021-09-03 04:15

　　糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）作为终末期肾病的主要原因,是糖尿病的常见并发症之一。近年来,研究证据表明核转录因子Kappa B（nuclear factor kappa B,NF-κB）的激活和含有热蛋白结构域的甘氨酸结合及寡聚结构域样受体3炎症因子（NACHT,LRR and PYD domain-containing protein 3,NLRP3炎症小体）在糖尿病肾病的炎症进展过程密切相关。然而,它们的机体作用机制尚不清楚。近年来研究显示,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）异常表达在糖尿病肾病等多种疾病中扮演着重要角色。然而,lnc RNA在糖尿病肾病的炎症过程中的功能和作用机制仍未揭开神秘面纱。在我们课题组前期实验中,我们通过转录组测序技术（RNA sequencing,RNA-seq）和实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR,q RT-PCR）在糖尿病肾病db/db小鼠肾脏组织中鉴别了14个呈异常表达的lnc RNAs。在目前的实验中,我们进一步通过... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：100 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Gm4419在系膜细胞细胞质和细胞核中的表达

43中，构建稳定表达Gm4419的质粒。如图1.4所示(彩图见附图部分)，经BamH I和EcoRV双酶切验证和测序验证，Gm4419过表达质粒构建成功。如图1.5荧光定量PCR和图1.6(彩图见附图部分) FISH结果证实Gm4419过表达质粒能够显著上调Gm4419的表达(p＜0.01)。如图1.5荧光定量PCR验证3条Gm4419 siRNAs，结果显示H-MCsiRNA Gm4419 no.3组沉默效率最佳(p＜0.01)，所以选择H-MC siRNA Gm4419no.3组的siRNA进行后续实验。此外，如图1.6(彩图见附图部分) FISH结果所示，与H-MC mock组及H-MC siNC组比较，H-MC siGm4419组中Gm4419的表达被明显抑制。以上结果显示Gm4419过表达质粒和Gm4419 siRNA构建成功。图 1.5 转染 Gm4419 过表达质粒和 siRNAs 对系膜细胞中 Gm4419 表达的影响Figure 1.5 The effect of Gm4419 over-expression plasmid and siRNAs on Gm4419 in MCs*，p <0.05； **，p <0.01； NS

p <0.05； **，p <0.01； NS， no significant2.4 Gm4419在高糖条件下促进系膜细胞炎症和纤维化如图1.7 qRT-PCR显示，高糖组中促炎症因子mcp-1、TNF-α、IL-1β和纤维标记蛋白Fn、Col.IV的mRNA表达水平均高于低糖组。如图1.8 qRT-PCR显示与L-MCmock组和L-MC pcDNA3.1组比较，L-MC Gm4419(+)组mcp-1、TNF-α、IL-1β、Fn和Col.IV的mRNA水平显著升高；相反，H-MC siGm4419组mcp-1、TNF-α、IL-1β、Fn和Col.IV的mRNA水平与H-MC mock组及H-MC siNC组相比显著降低。此外，如图1.9 Western blot和图1.10 (彩图见附图部分)免疫荧光结果均显示，与L-MCmock组和L-MC pcDNA3.1组比较，L-MC Gm4419(+)组mcp-1、TNF-α、IL-1β、Fn和Col.IV的蛋白水平显著升高；相反，H-MC s

【参考文献】：
期刊论文
[1]A nuclear import inhibitory peptide ameliorates the severity of cholecystokinin-induced acute pancreatitis[J]. Tamás Letoha,Csaba Somlai,Tamáas Takács,Annamária Szabolcs,Katalin Jármay,Zoltán Rakonczay Jr,Péter Hegyi,Ilona Varga,József Kaszaki,István Krizbai,Imre Boros,Ern（?） Duda,Erzsébet Kusz,Botond Penke.  World Journal of Gastroenterology. 2005(07)



本文编号：3380384