毛兰素诱导膀胱癌细胞凋亡及其分子机制

发布时间：2021-09-16 18:51

　　目的：膀胱癌（Bladder cancer）是泌尿系统最常见的肿瘤之一,其中大部分的癌细胞来自膀胱内面黏膜表皮,即移形上皮细胞癌（TCC）,以浸润的方式生长,复发率为50%-70%。虽然近年来膀胱癌的治疗取得一些进展,但是目前尚无有效治疗药物。来源于天然产物的抗肿瘤药物是近年来肿瘤药物研发中的热点,如紫杉醇等多种一线临床抗肿瘤药物来源天然产物。石斛是传统中药材,现代药理学研究表明石斛具有抗肿瘤活性、抗衰老、增强机体免疫力、扩张血管以及抗血小板凝集等多种效能,特别是其抗肿瘤活性日益受到广泛关注。本文主要探讨石斛活性化合物毛兰素对人膀胱癌细胞的抗癌活性及其分子机制。方法：运用细胞增殖MTT法,检测不同浓度的毛兰素给药EJ细胞48h后对细胞增殖的抑制作用,并计算出半数抑制浓度IC50；采用形态学观察结合DAPI染色检测毛兰素对EJ细胞凋亡形态的影响；细胞周期流式分析毛兰素对细胞周期分布的影响；通过Western blot检测毛兰素对细胞凋亡下游相关蛋白PARP, Caspase3/7的影响,重点考查毛兰素对细胞凋亡线粒体通路中Bcl-2抗凋亡蛋白以及促凋亡蛋白家族表达的影响,通过RNAi技术... 

【文章来源】：西南交通大学四川省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 膀胱癌概述
        1.1.1 膀胱癌的病理生理学
        1.1.2 膀胱癌的临床治疗
        1.1.3 膀胱癌发生的分子机制及分子靶向治疗
    1.2 细胞凋亡概述
        1.2.1 细胞凋亡的概念
        1.2.2 细胞凋亡的相关通路
    1.3 应激活化蛋白激酶SAPK/JNK通路
        1.3.1 JNK及其编码基因
        1.3.2 MAP3Ks级联反应激活JNK通路
        1.3.3 JNK介导的细胞凋亡
    1.4 shRNA简介
        1.4.1 RNA干扰(RNAi)的发现
        1.4.2 RNA干扰的分子机制
        1.4.3 RNA干扰技术的应用
        1.4.4 BLOCK-iT RNAi技术和Gateway技术
    1.5 毛兰素简介
        1.5.1 石斛属植物的药用价值
        1.5.2 毛兰素的化学结构与功效
        1.5.3 本课题的来源及研究意义
第二章 毛兰素诱导膀胱癌细胞凋亡及其分子机制
    2.1 实验材料
        2.1.1 肿瘤细胞株、菌株、药品和质粒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞复苏
        2.2.2 细胞传代
        2.2.3 细胞冻存
        2.2.4 细胞计数
        2.2.5 细胞形态学观察
        2.2.6 DAPI染色
        2.2.7 MTT法测定细胞增殖
        2.2.8 细胞周期检测
        2.2.9 蛋白质提取
        2.2.10 质粒的转化与提取
        2.2.11 shRNA的设计
    2.3 结果
        2.3.1 毛兰素对人膀胱癌EJ细胞的增殖抑制作用
        2.3.2 毛兰素诱导EJ细胞凋亡的形态学特征
        2.3.3 毛兰素对细胞周期的影响
        2.3.4 毛兰素诱导激活PARP和Caspase级联反应
        2.3.5 毛兰素对Bcl-2家族蛋白的影响
        2.3.6 毛兰素激活JNK通路,引起c-Jun和Bcl-2的磷酸化
第三章 讨论
    3.1 毛兰素抑制人膀胱癌EJ细胞的增殖并诱导其凋亡
    3.2 毛兰素能阻滞细胞周期于G2/M期
    3.3 毛兰素能激活Caspase级联反应,引起PARP的断裂
    3.4 毛兰素诱导Bim的上调和Bcl-2的下调引起细胞调亡
    3.5 毛兰素通过激活SAPK/JNK通路引起细胞凋亡
结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]现代膀胱癌发病因素的流行病学分析[J]. 王月生,钟惟德.  现代泌尿生殖肿瘤杂志. 2010(06)
[2]毛兰素对胃癌细胞SGC-7901端粒酶活性的影响[J]. 洪卫,郭勇,马胜林,冯建国,杜灵彬,凌雨田,牟瀚舟,张沂平.  浙江实用医学. 2009(03)
[3]细胞凋亡研究进展[J]. 李超,伏圣博,刘华玲,马欣荣.  世界科技研究与发展. 2007(03)
[4]JNK信号通路研究进展[J]. 姚毓奇,李晓玫.  细胞生物学杂志. 2005(03)
[5]麻疯树植物资源研究概况[J]. 林娟,周选围,唐克轩,陈放.  热带亚热带植物学报. 2004(03)
[6]毛兰素诱导人白血病HL-60细胞的凋亡（英文）[J]. 李运曼,王海燕,刘国卿.  Acta Pharmacologica Sinica. 2001(11)



本文编号：3397109