伴PTEN突变前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖机制的研究

发布时间：2021-10-02 04:00

　　目的通过蛋白激酶抑制剂敏感性分析揭示伴PTEN突变前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖的分子机制。方法选择9种关键激酶抑制剂作用于PC-3细胞,CCK8法检测蛋白激酶抑制剂对PC-3细胞增殖的影响;PTEN基因经RT-PCR扩增后测序检测PC-3细胞中PTEN的突变;Western blot分析PI3K和mTOR抑制剂对PC-3细胞信号通路中关键激酶表达水平的影响;细胞经蛋白激酶抑制剂处理后,采用Annexin V-FITC和溴化丙啶染色,荧光显微镜观察PC-3细胞的凋亡情况。结果 GSK2126458、AZD6482、Rapamycin和OSI-027可明显抑制PC-3细胞增殖,且AZD6482和Rapamycin对PC-3细胞增殖具有协同抑制作用;测序结果显示PC-3细胞存在PTEN第78位氨基酸错义突变;Western blot结果表明,与对照组和AZD6482单药组相比,Rapamycin单药以及AZD6482联合Rapamycin作用于PC-3细胞后AKT蛋白磷酸化水平明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。药物作用于细胞48和72 h后,AZD6482单药组、Rapam... 

【文章来源】：毒理学杂志. 2020,34(04)CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

不同浓度蛋白激酶抑制剂作用PC-3细胞后

结果表明,AZD6482+Rapamycin联合使用对PC-3细胞的抑制作用与单药抑制作用比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AZD6482和Rapamycin对PC-3细胞增殖具有协同抑制作用,而AZD6482+AZD6244联合使用对PC-3细胞增殖不具有协同抑制作用,见图2。2.3 PTEN基因突变的检测

2015年,Park等[15]发现联合应用PI3K和MEK抑制剂对PCa细胞生长有抑制作用。AZD6482是一种有效的、选择性的PI3Kβ抑制剂,能阻断该激酶与ATP相互作用[16]。Rapamycin是一种mTOR蛋白特异性抑制剂,早期用于免疫排斥反应,目前已广泛应用于临床肿瘤的治疗[17]。AZD6244是一种高选择性的MEK1/2抑制剂,其用于实体瘤的治疗已进入Ⅱ期临床[18]。本研究使用多种蛋白激酶抑制剂作用于PC-3细胞,结果表明,PI3K抑制剂(GSK2126458和AZD6482)和mTOR抑制剂(Rapamycin和OSI-027)对PC-3细胞增殖的抑制作用更加明显,但Mek抑制剂(AZD6244)对PC-3细胞的抑制作用不明显。本研究进一步探究联合使用抑制剂对PC-3细胞的影响。由于GSK2126458和OSI-027作用靶点较为广谱,所以最终选择AZD6482和Rapamycin联合使用,结果显示二者对PC-3细胞增殖有协同抑制作用。这提示PC-3细胞增殖主要依赖于PI3K/AKT信号通路。在小鼠模型中,PI3K和MEK抑制剂联合应用能够阻止前列腺上皮内瘤变为去势抵抗性前列腺癌,并对伴有PTEN缺失的前列腺肿瘤生长有抑制作用[19]。然而,本研究结果显示,AZD6482和AZD6244联合使用与单独使用对PC-3细胞的抑制作用差异无统计学意义。图4 抑制剂对PC-3细胞凋亡的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]前列腺癌发生发展的流行病学研究进展[J]. 杨进益,杨明州,魏伟,岳文昌.  临床泌尿外科杂志. 2017(09)
[2]PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1在前列腺癌及前列腺增生中的表达及其意义[J]. 蒋宏毅,赵晓昆,钟朝晖,姚干,王荫槐,张磊,欧阳时锋,谢续标,彭龙开,易东生,张选志,扬罗艳,刘任,黄循.  中国现代医学杂志. 2008(09)



本文编号：3417965