苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白MAP30对膀胱癌抑制作用的研究

发布时间：2021-10-24 23:48

　　研究背景膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤,目前临床上治疗方法主要有手术治疗、化疗及放疗,这些方法不仅价格昂贵,且易因反复用药产生耐药性和毒副作用。祖国医学对于膀胱肿瘤的研究起步较晚,但随着对中草药研究的进一步深入,中医药在防治膀胱肿瘤方面也有了显著的进步。中药治疗即可协同杀伤肿瘤,又有助于机体从整体水平调节免疫平衡状态,发挥扶正祛邪的功效。苦瓜是民间喜爱的食物,近年来科研工作者从苦瓜果实和种子中先后提纯获得多种具生物活性的有效成分,具有抗肿瘤、降血糖、抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化等多种功效,在这些生物活性物质中最引人注目的属核糖体失活蛋白（RIP）。MAP30是Ⅰ型RIP的一种,对多种肿瘤细胞均有抑制作用,但是关于MAP30对人膀胱癌细胞的生长抑制及凋亡影响的相关研究尚未见报道。研究目的本文通过分子克隆技术表达并纯化苦瓜重组MAP30蛋白,并通过咪唑兰（MTT）法、流式细胞仪检测分析MAP30对5637人膀胱肿瘤细胞增殖的抑制作用及诱导肿瘤细胞凋亡的作用。研究方法（1）采用PCR技术从苦瓜基因组中扩增出MAP30基因片段,对其测序并构建重组表达载体pET-28a （+）-MAP30,转化... 

【文章来源】：南京中医药大学江苏省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

琼脂耱凝胶电泳鉴定PCR产物

图4-3 MAP30蛋白的小量诱导表达M: Marker： 1 /3/5/7 ：无 IPTG 诱导对照;2/4/6/8 ： 1mM IPTG 诱导4. 4 MAP30大量诱导表达后镇胶纯化收集大量的MAP30经超声破碎至液体清亮，离心得到的h清进行镍胶纯化，收集含目标蛋白的冼脱峰，12%SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度，得到纯度较高的重组蛋白。纯化结果图4-4。\1 87 6 5 4 321图4^4MAP30蛋白的纯化M: Protein Marker; 1; 20mMTris-Hcl 洗脱组分；2 ； 20mM 咪睡洗脱组分；3、4 ； 50mM味唾洗脱组分；5、6 ： lOOmM味哇洗脱组分；7、8 ： 250mM咪睡洗脱组分4. 5各洗脱组分透析及浓度测定取上述50mM、100 mM、250 mM咪哗洗脱物于透析袋中，于1XPBS缓冲液中透析过夜，取透析物12000rpm离心Imin,收集蛋白液，稀释4倍后

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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本文编号：3456234