SDF-1/CXCR4轴对BMSCs经肾动脉途径归巢至阿霉素肾病大鼠肾脏的作用

发布时间：2021-10-25 03:31

　　[目的]1.分离、提纯、培养大鼠BMSCs并进行免疫荧光标记示踪,对比普通培养和低氧环境预处理对BMSCs表面CXCR4/CXCR7表达的影响。2.用ADR进行诱导大鼠慢性肾病的动物模型,检测损伤肾组织中SDF-1mRNA的表达情况。3.经肾动脉途径分别将普通培养及低氧处理的BMSCs移植于ADR大鼠模型,并设立对照组,通过基本指标评估治疗效果。对比免疫荧光示踪BMSCs于肾组织的定植效果,并分析SDF-1/CXCR4对于BMSCs归巢至损伤肾组织的作用。[方法]1.取2只SD雄大鼠的股骨及胫骨,从骨髓腔内提取BMSCs进行分离提纯,经流式细胞仪确定为目标细胞后传代培养并鉴别,取P4代BMSCs,用携带绿色免疫荧光蛋白（GFP）的腺病毒转染进行标记。将标记后的BMSCs分为两组,C1组继续普通培养,C2组放入2%02、93%N2、5%CO2环境中培养48h,分别加双抗并固定后送流式细胞仪进行检测各组BMSCs细胞表面CXCR4/CXCR7的表达情况。2.50只雄性SD大鼠切除左肾,4周后经尾静脉途径给予阿霉素2.5mg/Kg每周1次连续给药2周,成功建立慢性肾病模型后,处死4只模型大鼠... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１流式细胞仪检测ＢＳＭＣｓ的双参数直方二维图点并选

结果??１．ＢＭＳＣｓ的培养、鉴定及标记结果??采集分离后ＢＭＳＣｓ经过多次传代培养并过滤杂质，梭形细胞数逐渐增多，至Ｐ４代??细胞生长稳定，约３天生长期即可贴壁达５０％，形态均一呈梭形，旋涡状生长，为高纯??度细胞〔图１－１）。流式细胞仪检测细胞表面抗原表型为ＣＤ２９、ＣＤ４４的阳性率分别为??９６．９％和９８．９％，而表型为ＣＤｌｌｂ、ＣＤ４的阳性率为１．９％和２．２％。??经携带增强型绿色荧光蛋白的Ａｄ５／Ｆ３５腺病毒转染６ｈ后，细胞呈多角形，换等量??全培养液２４ｈ后观察绿色荧光表达率为７５％，形态与正常培养的细胞一致〔图１－２）。??

生化检查确定造模成功后选取模型大鼠及正常大鼠各四只处死取肾脏组织，制作石??蜡切片后行ＨＥ染色，光镜下观察可见造模后大鼠肾小球局灶节段性硬化、肾小管萎缩、??肾间质片状纤维化及大量炎性细胞浸润，部分肾小管内还可见脱落的上皮细胞。如图３??所示，表明模型制作成功。??图３：造模成功的大鼠贤组织??３．?３?ＡＤＲ慢性肾病大鼠肾组织ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ相对表达量的检测??利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，根据ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ对应曲线及实验ＣＴ值，得到ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的??表达量（见表３〕并用ＳＰＳＳ软件分析。结果显示：造模成功的ＡＤＲ慢性肾病大鼠肾组织??内ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的表达量较正常大鼠明显升高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。??表３正常大鼠及ＡＤＲ慢性肾病大鼠肾组织ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的相对表达量（７?士ｓ）??ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ??ＩＴ．常大鼠?１．０１＋０．０６??ＡＤＲ造模大鼠?１．４１?±０．１４??两组大鼠相比较，Ｐ＜０．０１，?ＡＤＲ慢性肾病造模人鼠肾绀织ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的相对表达量显著高于ｉＴ？：常大鼠。??１９??

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本文编号：3456563