G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析

发布时间：2021-11-01 23:18

　　目的构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因的原核表达质粒pET28a（+）/C-G250肽-C,并通过大肠杆菌进行原核表达并纯化,分析表达融合蛋白的免疫原性及抗原性。方法 PCR扩增编码G250抗原中249～268氨基酸的基因片段,将G250肽插入去除主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/C-G250肽-C,为更换酶切位点,以pGEMEX/C-G250肽-C为模板,PCR扩增C-G250肽-C基因片段,最终将目的基因亚克隆入原核表达质粒pET28a（+）中,IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni 2+-NTA亲和层析法纯化重组融合蛋白,SDSPAGE鉴定融合蛋白的表达,纯化后融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗体的滴度。结果酶切及基因测序鉴定证实融合基因正确重组于表达质粒pET28a（+）中,原核表达并纯化后,该分离纯化融合蛋白纯度达95%以上,其相对分子质量约为22.35。BALB/c小鼠经4次免疫后,所有小鼠血清中均可检测到抗体,免疫第6周其血清中抗体滴度可达到1∶5.12×105,抗G250肽抗体滴度达到... 

【文章来源】：西安交通大学学报(医学版). 2014,35(01)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1材料与方法
2结果
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]EGFRvIII/PEP-3 cDNA与HBcAg重组基因原核表达载体的构建、表达与免疫分析[J]. 段小艺,王健生,郭佑民,韩俊丽,王全颖,杨广笑.  细胞与分子免疫学杂志. 2007(01)
[2]重组基因c-Aβ-c的构建及其表达蛋白的免疫原性分析[J]. 冯改丰,胡海涛,李月英,韩华,王全颖,杨广笑.  细胞与分子免疫学杂志. 2005(05)



本文编号：3470873