Intermedin对血管紧张素Ⅱ诱导的NRK-52E细胞纤维化的影响及机制研究

发布时间：2017-05-07 20:02

  本文关键词：Intermedin对血管紧张素Ⅱ诱导的NRK-52E细胞纤维化的影响及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察intermedin(IMD)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞系NRK-52E纤维化的影响,并探讨其机制。方法:体外培养的NRK-52E细胞,随机分为4组:正常对照组、Ang Ⅱ干预组(10-6mol/L)、转染IMD质粒+Ang Ⅱ干预组、转染空质粒+Ang Ⅱ干预组。采用Fugene HD转染试剂,将p IRES2-EGFP空质粒和p IRES2-IMD真核表达质粒分别转染至NRK-52E细胞,应用流式细胞仪检测转染效率,转染成功48 h后用Ang Ⅱ(10-6mol/L)干预24 h。用real-time RT-PCR检测各组细胞中I型胶原(Col I)的表达;Western印迹法检测Col I、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;ELISA法检测细胞培养上清液内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、环磷酸鸟苷(c GMP)的浓度。结果:通过荧光显微镜观察转染成功后细胞的EGFP表达,流式细胞术检测细胞转染效率为(35.73±7.28)%。与正常对照组相比,Ang Ⅱ组Col I的表达显著上调(m RNA水平t=4.835,P=0.008;蛋白质水平P0.001),E-cadherin的表达显著下降(t=4.284,P=0.013);转染IMD质粒后Col I的表达较Ang Ⅱ组明显下降(m RNA水平t=3.032,P=0.039;蛋白质水平P0.001),E-cadherin的表达明显上调(t=6.054,P=0.004);而转染空质粒后Col I、E-cadherin的表达与Ang Ⅱ无明显差别(Col I m RNA水平t=0.951,P=0.395;蛋白质水平t=1.208,P=0.294;E-cadherin蛋白质水平t=1.613,P=0.182)。与正常对照组相比,Ang Ⅱ组细胞上清液e NOS、c GMP的浓度显著增加(e NOS t=20.718,P0.001;c GMP t=8.324,P=0.001);与Ang Ⅱ组相比,IMD质粒+Ang Ⅱ组的浓度进一步增加(e NOS t=10.682,P0.001;c GMP t=18.974,P0.001);而转染空质粒组+Ang Ⅱ组e NOS及c GMP的浓度与Ang Ⅱ组无明显差别(e NOS t=2.039,P=0.111;c GMP t=1.469,P=0.216)。结论:IMD对Ang Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞纤维化有抑制作用,可能通过e NOS-c GMP途径阻断Ang Ⅱ的作用实现的。
【关键词】：血管紧张素II 纤维化 Intermedin 内皮型一氧化氮合酶 环磷酸鸟苷
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 主要缩略词中英文对照9-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12-25
• 1.1 实验材料12-15
• 1.2 研究方法15-24
• 1.3 统计学分析24-25
• 2 结果25-31
• 2.1 细胞培养25
• 2.2 转染质粒后荧光显微镜下观察25-26
• 2.3 IMD转染效率的检测26
• 2.4 IMD对NRK-52E细胞Col I表达的影响26-27
• 2.5 IMD对NRK-52E细胞E-cadherin表达的影响27-28
• 2.6 IMD对各组NRK-52E细胞上清液eNOS、cGMP浓度的影响28-31
• 3 讨论31-33
• 4 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述37-50
• 参考文献44-50
• 致谢50-51
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果51-52
• 个人简历52

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