膀胱癌尿液外泌体lncRNA诊断模型的建立及对膀胱癌复发监测的临床意义

发布时间：2021-11-28 18:27

　　目的:近年来有研究发现膀胱癌细胞可以分泌外泌体（exosomes）进入尿液中,并与癌症的进展有关。外泌体中含有致癌长链非编码RNA（lncRNAs）分子,其表达水平可反映肿瘤的动态变化。因此,尿液外泌体中差异表达的lncRNA分子可作为膀胱癌诊断和预后的新型非侵入性生物标志物。本研究的目的是提取并鉴定尿液外泌体,分析其lncRNA分子表达谱;构建尿液外泌体lncRNA诊断模型用于膀胱癌诊断,并探究尿液外泌体lncRNA分子与膀胱癌复发预测的关系。方法:1.分离并提取膀胱癌患者尿液外泌体,并通过透射电子显微镜、免疫印迹技术、纳米粒径分析等多种方法鉴定外泌体。2.通过检索文献获得在膀胱癌组织中异常表达且与膀胱癌的发生、发展密切相关的8个lncRNAs作为候选分子,如下:MALAT1,PCAT-1,SPRY4-IT1,UCA1,MEG3,H19,UBC1 和 TUG1。3.在训练阶段,提取104例膀胱癌患者和104例健康对照者尿液外泌体中的RNA,利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析上述8个lncRNAs的表达情况,筛选出在膀胱癌尿液外泌体中异常表达的lncRNA分子。针对异常表达的... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１：尿液外泌体的特征

图３：验证尿液外泌体ＩｎｃＲＮＡ?ＭＡＬＡＴ１、ＰＣＡＴ－１和ＳＰＲＹ４－ＩＴ１的差异表达趋??势及其检测膀胱癌的诊断效能。使用ｑＲＴ－ＰＣＲ检测验证组膀胱癌患者（ｎ＝８０）??与健康对照（ｎ＝８０）中尿液外泌体ｌｎｃＲＮＡ?ＭＡＬＡＴ１?（ａ）、ＰＣＡＴ－１?（ｂ）和??ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｃ）的表达水平（Ｐ＜０．００１?）。ＲＯＣ曲线分析显示尿液外泌体ＩｎｃＲＮＡ??ＭＡＬＡＴ１?（ｄ）、ＰＣＡＴ－１?（ｅ）和ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｆ）在验证组中对膀胱癌的诊断效??能。＊＊＊表示尸＜０．００１。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＵＥ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ＭＡＬＡＴ１，?ＰＣＡＴ－１?ａｎｄ?ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?ａｓ?ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ??ｆｏｒ?ＢＣ?ｄｉａｇｎｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｔｈｅｉｒ?ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ?ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＵＥ－ｄｅｒｉｖｅｄ??ＭＡＬＡＴ１?（ａ），?ＰＣＡＴ－１?（ｂ）?ａｎｄ?ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｃ）?ｉｎ?ＢＣｓ?（ｎ＝８０）?ｖｓ．?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌｓ??（ｎ＝８０）?ｕｓｉｎｇ?ｔｈｅ?ｑＲＴ－ＰＣＲ?ａｓｓａｙ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｓｅｔ?（Ｐ＜０．００１）．?ＲＯＣ?ｃｕｒｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ??ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈｅ?ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ?ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ?ｆｏｒ?ＢＣ?ｏｆ?ＵＥ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ＭＡＬＡＴ１?（ｄ），?ＰＣＡＴ－１?（ｅ）??ａｎｄ?ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｆ）?ｉｎ?ｔｈｅ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｓｅｔ．?＊＊＊?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?Ｐ?＜０．００１．??

图４：尿液外泌体ＩｎｃＲＮＡ的稳定性。尿液组和尿液外泌体ＲＮＡ组分别与ＲＮａｓｅ??Ａ孵育Ｏｍｉｎ、３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ和９０ｍｉｎ。ＲＮａｓｅ?Ａ对尿液组外泌体ＩｎｃＲＮＡ水平无??影响（ａ－ｃ）。而尿液外泌体ＲＮＡ组在３０?ｍｉｎ内经过ＲＮａｓｅ?Ａ处理完全降解（ｄ－ｆ）。??尿液样本在－８０°Ｃ的环境存放１个月、２个月和３个月，这种处理方式对尿液外泌??体ＩｎｃＲＮＡ的含量无影响（ｇ－ｉ）。＊代表尸＜０．０５，＊＊代表尸＜０．０１，＊＊＊代表尸＜０．００１。??Ｆｉｇｕｒｅ?４．?Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＵＥｓ．?Ｕｒｉｎｅ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｅｘｏｓｏｍｅ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄｓ?ｇｒｏｕｐ??ｗｅｒｅ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＲＮａｓｅ?Ａ?ｆｏｒ?０，?３０，?６０，?ａｎｄ?９０?ｍｉｎｕｔｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．?ＲＮａｓｅ?Ａ??ｈａｄ?ｎｏ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍａｌ?ＩｎｃＲＮＡｓ?ｉｎ?ｕｒｉｎｅ?ｇｒｏｕｐ?（ａ－ｃ）．?Ｈｏｗｅｖｅｒ，??ｅｘｏｓｏｍｅ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄｓ?ｇｒｏｕｐ?ｗｅｒｅ?ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ?ｄｅｇｒａｄｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｆ??ＲＮａｓｅ?Ａ?ｗｉｔｈｉｎ?３０?ｍｉｎ?（ｄ－ｆ）．?Ｕｒｉｎｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｗｅｒｅ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ?ａｔ?－８０?°Ｃ?ｆｏｒ?１，?２，?ａｎｄ?３??ｍｏｎｔｈｓ，?ａｎｄ?ｔｈｉｓ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ?ｈａｄ?ｎｏ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍａｌ?ＩｎｃＲＮＡｓ?（ｇ－ｉ）．＊??ｒｅｐ


本文编号：3524928