cIAP1、Survivin核表达在膀胱尿路上皮癌组织及细胞中的研究

发布时间：2022-01-01 07:57

　　膀胱癌是泌尿系统中最为常见的恶性肿瘤，具有较高的发病率及死亡率；与其它恶性肿瘤相类似，凋亡缺陷是膀胱癌细胞的显著特征，表现出增殖与凋亡的失衡以及对化疗药物的抵抗；因此，如何攻克细胞水平上肿瘤细胞的凋亡缺陷与异常增殖并以此来改进现有的治疗方案已成为当前研究的热点。凋亡抑制蛋白家族IAPs（Inhibitor of Apoptosis Proteins）是近年来发现的极为重要的凋亡抑制因子，能够通过核转录因子NF-κB（Nuclear Factor kappa-enhancerBinding protein）、肿瘤坏死因子TNF-α（Tumor Necrosis Factor-α）等信号传导通路以及直接或间接抑制含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspases的活性而调控细胞的凋亡；某些IAPs成员在肿瘤细胞中的表达、亚细胞定位还与肿瘤的进展、化疗抵抗以及患者预后密切相关；有报道显示细胞核中Survivin（Survivin-N）的表达是Ta/T1期膀胱癌的生物标记物，并且与Ta/T1期膀胱癌患者的预后密切相关；本课题组之前的系列研究表明，细胞核中cIAP1（cIAP1-N）的过表达与膀胱移... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 cIAP1、Survivin 在膀胱癌组织中表达及临床意义的研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1. 患者及组织标本
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 抗体稀释
        2. 方法
            2.1 Western blot
            2.2 免疫组化
            2.3 统计学分析
    结果
        1.Western blot 检测 IAPs 成员在膀胱癌与正常膀胱上皮组织中的表达情况
        2.免疫组化检测 IAPs 成员在不同恶性程度膀胱癌组织中的表达和分布情况
        3.cIAP1-N 与 Survivin-N 表达的相关性分析
        4.cIAP1 与 Survivin 核表达对患者存活率的影响
        5.cIAP1 与 Survivin 核表达对患者预后的影响
    讨论
    结论
    参考文献
第二部分 cIAP1、Survivin 核表达对膀胱癌细胞功能影响的研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 实验用细胞系
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2. 方法
            2.1 Western blot 检测cIAP1 与 Survivin 的表达
            2.2. 激光共聚焦显微镜检测不同 IAPs 成员的亚细胞定位
            2.3 Western blot 检测 cIAP1 与 Survivin 在细胞质、核中的表达
            2.4 免疫共沉淀检测 cIAP1 与 Survin 的相互作用
            2.5 Hoechst33258 检测细胞凋亡
            2.6 Rhodamine-Phalloidin 进行 F-actin 染色
            2.7 流式细胞技术检测膀胱癌细胞 T24 的细胞周期
            2.8 细胞划痕试验
            2.9 体外细胞侵袭实验
    结果
        1 Western blot 检测 cIAP1 与 Survivin 在不同膀胱细胞系中的表达
        2 激光共聚焦显微镜检测 LMB 对 IAPs 成员亚细胞定位的影响
        3.激光共聚焦显微镜检测cIAP1 与 Survivin 的细胞核表达情况
        4 Western blot 检测 LMB 对 cIAP1 与 Survivin细胞核表达的影响
        5.免疫共沉淀检测 cIAP1 与 Survivin 在膀胱癌细胞核中的相互作用
        6.Hoechst33258 检测 cIAP1 与 Survivin 核表达改变对膀胱癌细胞凋亡的影响
        7 Rhodamine-Phalloidin 染色检测 LMB 对 T24细胞骨架结构的影响
        8 流式细胞仪检测 cIAP1 与 Survivin 核表达改变对膀胱癌细胞周期的影响
        9 细胞划痕实验检测 cIAP1 与 Survivin 核表达改变对膀胱癌细胞迁移的影响
        10 ECMatrix gel 检测 cIAP1 与 Survivin 核表达改变对T24细胞侵袭的影响
    讨论
    结论
    参考文献
第三部分 cIAP1、Survivin 核表达改变对其他凋亡调控蛋白影响研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1. 实验用细胞系
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2. 方法
            2.1 Western blot 检测 IAPs 表达
            2.2 Western blot 检测 Caspases 的表达
            2.3 Western blot 检测 PTEN 在细胞质、核中的表达
            2.4 Hoechst33258 检测细胞凋亡
            2.5 MTT 检测细胞毒性
            2.6 Rhodamine-Phalloidin 进行 F-actin 染色
    结果
        1.Western blot 检测其他 IAPs 成员在LMB 刺激前后表达的改变
        2 Western blot 检测 Caspases 成员在LMB 刺激前后表达的改变
        3 Western blot 检测 PTEN 在LMB 刺激前后表达的改变
        4 Hoechst33258 检测 LMB 与多柔比星联合应用对 T24 细胞凋亡的影响
        5 MTT 检测 LMB 与多柔比星联合应用对T24细胞药物毒性的影响
        6 Rhodamine-Phalloidin 检测 LMB 与多柔比星联合应用对细胞骨架的影响
    讨论
    结论
    参考文献
总结
综述
    参考文献
博士期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]凋亡抑制基因Livin在膀胱癌中的表达及意义[J]. 宋希双,张志伟,车翔宇,姜涛,李先承,殷积斌.  中华泌尿外科杂志. 2006(S1)
[2]紫杉醇诱导ACC细胞凋亡及与G2/M期阻滞关系研究[J]. 林李嵩,林国础,陈万涛,郭伟,林旭.  中华口腔医学杂志. 2002(02)
[3]X染色体相关凋亡抑制蛋白在移行细胞癌中的表达及临床意义[J]. 王丽娜,杨德勇,车翔宇,何中舟,王健伯,吴东军,李先承,宋希双.  中华泌尿外科杂志. 2009 (07)



本文编号：3561950