抑制肾小管上皮细胞Rab27a通过miR-26a-5p/CHAC1/NF-kB通路改善糖尿病肾病炎症的机制研究

发布时间：2022-01-15 06:51

　　研究背景:最初,外泌体被认为是细胞垃圾。后来,随着外泌体参与细胞间的交流的功能被发现,大量外泌体对其受体细胞的影响的研究涌出,但外泌体对供体细胞的影响尚不清楚。已有研究证明在不同刺激下近端肾小管上皮细胞分泌的外泌体会促进急慢性肾脏疾病的进展。研究目的:本研究旨在探讨抑制肾小管上皮细胞中外泌体分泌关键调节基因Rab27a的表达进而抑制对其供体细胞肾小管上皮细胞炎症因子的分泌是否能改善糖尿病肾病炎症。研究方法及结果:首先我们证明了沉默Rab27a抑制外泌体分泌可以抑制牛血清白蛋白（BSA）诱导的肾小管上皮细胞炎症因子的分泌,进一步我们在HFD/STZ诱导12周的糖尿病小鼠模型中通过免疫组织化学染色再次验证了糖尿病小鼠肾脏中Rab27a的表达是明显升高的,同时炎症指标IL-6和TNF-α以及纤维化指标COL-1表达的水平也都是显著升高的。此外,我们也证明了在BSA的刺激下肾小管上皮细胞分泌的外泌体中miR-26a-5p的表达是明显升高的,而细胞中miR-26a-5p的表达也是相应的降低了,而在BSA刺激下抑制Rab27a的表达后miR-26a-5p在肾小管上皮细胞中的表达相较于BSA组明显升... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ｑＲＴ－ＰＣＲ结果显示不同ｓｉＲａｂ２７ａ转染ＨＫ－２细胞后Ｒａｂ２７ａ?ｍＲＮＡ表达水平??

第一章通过抑制外泌体关键调节因子Ｒａｂ２７ａ的表达进而抑制ＨＫ－２细胞炎症因子的分泌??图１－２?ｑＲＴ－ＰＣＲ结果显示在ＢＳＡ刺激下将ｓｉＲａｂ２７ａ转染到ＨＫ－２细胞后Ｒａｂ２７ａ?ｉｎＲＮＡ的表??达水平??Ｆｉｇｕｒｅ．?１－２?Ｒａｂ２７ａ?ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＨＫ－２?ｃｅｌｌ?ｂｙ?ＢＳＡ?ｓｔｉｍｕｌｉ?ｏｒ?ｓｉＲａｂ２７ａ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ??ｑＲＴ－ＰＣＲ?＊ｐ＜０．０５?ｖｅｒｓｕｓ?ｓｉＮＣ，＃ｐ＜０．０５?ｖｅｒｓｕｓ?ＢＳＡ＋ｓｉＮＣ?ｇｒｏｕｐ??３．?３为了探索沉默外泌体关键调节基因Ｒａｂ２７ａ的表达对糖尿病肾病炎症的影响，??我们在转染ｓｉＲａｂ２７ａ２４小时后再用ｌＯｍｇ／ｍｌＢＳＡ刺激２４小时后结果显示在ＢＳＡ??刺激下炎症指标ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ?ｍＲＮＡ水平都都明显升高，而敲除Ｒａｂ２７ａ后炎症??因子ＩＬ－６和ＴＮＦ－?ａ的ｍＲＮＡ水平明显受到了明显的抑制（图１－３，表１－３）。??表１－３在ＢＳＡ刺激的情况下沉默Ｒａｂ２７ａ后ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ?ｍＲＮＡ的表达水平??Ｔａｂｌｅ．?１－３?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ＩＬ－６?ａｎｄ?ＴＮＦ－ａ?ｍＲＮＡ?ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｓｉＲａｂ２７ａ?ｕｎｄｅｒ?ｔｈｅ??ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＢＳＡ??ｓｉＮＣ?ＢＳＡ?ｓｉＲａｂ２７ａ?ＢＳＡ＋ｓｉＲａｂ２７ａ?Ｆ?值?Ｐ?值??ＩＬ－６?ｍＲＮＡ?１．０００?士?７．５１４?士?０．４９５６?±?３．１４０?土?４４．２１?＜０．０００１??０．０４６４６?０．９３５７＊＊?０．０１７９７＊＊?０．２１６１＃??ＴＮ

脏??中糖原的沉积明显升高，在本实验中我们观察到炎症因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ａ及纤维??化指标Ｃ０Ｌ１也是相应的升高，进一步我们也观察到Ｒａｂ２７ａ的大量堆积（图卜５）。??Ｑ?Ｒａｂ２７ａ?ＴＬ６?ＴＮＦａ?Ｃｏｌｌ??ｄ．??＼＇－广」?：??＼ｒ?，?．．?－?－?－?ｖ；?ｒ．ｊ．：；：??＼?么．?＇?＇?入八：．；．．．．＇??．?■?．?＂?：?■?．?．?？－??：．＇?乂?…＇??ｌ）Ｋ１）?ｆ；．．．；?，、??■??图１－５免疫组织化学染色显示Ｒａｂ２７ａ、ＴＮＦ－ｃｕ?ＩＬ－６ａｎｄＣＯＬ－ｌ的表达水平??Ｆｉｇｕｒｅ．１－５?Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?Ｒａｂ２７ａ＞?ＴＮＦ－ａ＞?ＩＬ－６?ａｎｄ?ＣＯＬ－ｌ（＊ｐ＜０．０５?ｖｅｒｓｕｓ??ＮＣ）??第四节讨论??外泌体最近作为一种治疗手段被广泛研宄，但由于其价格昂贵、操作复杂，??且对其进行修饰更是一项高精尖的技术这些问题尚未解决还存在一些技术难??题。而将直接抑制外泌体的分泌作为一种治疗手段，其敲除基因的技术己经很??成熟，并且操作也比较简便，故对抑制外泌体关键调节基因进而抑制外泌体的??分泌的探索是非常有价值的。??在糖尿病肾病患者中己经被证明患者尿液中的外泌体明显增多，并且在急??慢性肾病当中发现肾小球、足细胞及肾小管分泌的外泌体的量都是明显增多的，??＇?１４??


本文编号：3590128