抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的制备与功能的研究

发布时间：2022-01-15 07:46

　　前列腺癌在全球新发恶性肿瘤中居第二位，在发达国家中则位于第一位。我国前列腺癌的检出率上升很快，应该受到重视。前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen，PSCA）是Reiter等发现的一种前列腺癌相关蛋白，是表达在前列腺上皮细胞表面的含123个氨基酸残基的GPI锚定蛋白。由于PSCA具有较高的前列腺组织特异性，其蛋白质分子锚定在细胞表面而非分泌形式，因此PSCA可作为前列腺癌诊断及免疫治疗的潜在靶标而受到广泛关注。本研究的目标是基于国内外的研究现状和本室的研究基础，期望研制抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体。研究内容包括，首先采用杂交瘤技术制备抗人前列腺干细胞抗原的单克隆抗体，然后进行筛选以得到结合细胞表面PSCA活性的单克隆抗体，再在小鼠模型中评价其抑瘤活性和建立诊断前列腺癌的免疫组化方法。同时，扩增抗体的可变区基因，进行单链抗体的相关研究。对于抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的制备，抗原的选择与制备是筛选得到活性抗体的关键。首先根据文献选取PSCA分子全长的21-101位氨基酸，构建了含GST标签和His标签的PSCA融合蛋白的原核表达质粒，GST可以增加可溶... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

pET-42a(+)-GST-PSCA-His质粒模式图和GST-PSCA-His的表达载体鉴定电泳图

图 1-2 SDS-PAGE 分析 GST-PSCA-His 的表达M：Molecular weight maker；1：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，诱导；2：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，未诱导；3：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，超声后沉淀；4：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，超声后上清；5：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，全菌；

PSCA mAb 的筛选实验以 PSCA 重组蛋白为免疫原，常规免疫 BALB/c 小鼠，采用 B 淋巴细进行细胞融合，以 GST-PSCA-His 和 GST-His 为抗原，用 ELISA 筛选得到单抗的杂交瘤细胞克隆，共获得 6 株分泌抗 PSCA mAb 的杂交瘤细胞。于 个月以上，多次复苏传代仍能稳定分泌抗体，用 ELISA 测定效价均未降 PSCAmAb 的纯化和亚型交瘤细胞株经扩大培养后，大量制备腹水，并用 rProtein A 柱进行纯化(体的还原型 SDS-PAGE 如图 2-2 所示，结果显示获得较高纯度的 PSCA 抗链位置的不同表明了单抗之间存在差异。亚类(型)分析结果显示，4 株抗3#、61#)重链亚类为 IgG2b，2 株(24#、31#)为 IgG1，轻链全部为 κ 型(见图测定抗体浓度并调整为 2mg/mL，以 ELISA 法测定效价结果显示均在 1抗 PSCAmAb 的亚型与效价鉴定结果见表 2.1。

【参考文献】：
期刊论文
[1]前列腺癌诊治进展[J]. 孙颖浩.  上海医学. 2011(07)
[2]前列腺特异性膜抗原在前列腺癌患者外周血和组织中的表达及意义[J]. 王慧萍,徐蕾,宋黎明,于和鸣,邢念增.  中国肿瘤临床与康复. 2010(02)



本文编号：3590210