TRIP13促进肿瘤增殖耐药及其新型小分子靶向化合物作用机制研究

发布时间：2022-05-08 13:11

　　目的:探讨TRIP13对膀胱癌的增殖耐药机制以及靶标药物的作用机制。方法:1)通过分析TCGA和GEP数据库中肿瘤患者与正常对照组的临床数据样本,分析组织表达、生存曲线,探究TRIP13与肿瘤之间的关系。2)构建TRIP13过表达以及敲低的T24和J82细胞株,Western blot检测细胞转染情况;MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;细胞周期检测细胞生长周期分布;Annexin-V APC/PI双染法,流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫荧光检测γH2AX,检测TRIP13对DNA损伤的影响;Western blot检测MAD2、RAD50、γH2AX蛋白表达,阐明TRIP13促进肿瘤增殖耐药的机制。3)应用MTT法检测VCP17和VCP20对肿瘤细胞活性的影响;使用Annexin-V APC/PI双染法检测细胞凋亡情况,同时用Western blot法检测凋亡蛋白如PARP、Casepase 3的表达情况;应用细胞周期检测细胞周期分布情况,同时检测细胞周期相关蛋白如Cyclin B1;使用TRAP染色探究VCP17和VCP20对破骨细胞分化的影响,同时用实时荧光定量PCR,检测多... 

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 研究背景
    1. 中医对肿瘤的认识
    2. TRIP13在肿瘤中的作用
        2.1 TRIP13在细胞中的生物学功能
        2.2 TRIP13过表达与人类肿瘤有关
        2.3 TRIP13异常表达可导致肿瘤发生
        2.4 TRIP13升高促进肿瘤进展
        2.5 TRIP13导致肿瘤细胞对化疗药物的敏感性降低
        2.6 靶向TRIP13可能是治疗肿瘤的一个前景
第二部分 实验研究
    实验一: TRIP13促进肿瘤增殖及耐药机制探究
        1. 实验材料
            1.1 实验试剂
            1.2 试剂配制
            1.3 主要耗材
            1.4 细胞株及培养条件
        2 实验仪器
        3 实验方法
            3.1 细胞培养
            3.2 质粒制备及抽提
            3.3 细胞构建
            3.4 细胞增殖毒性检测
            3.5 免疫印迹(Westem-Blot)
            3.6 细胞周期检测
            3.7 细胞凋亡检测
            3.8 细胞克隆实验
            3.9 γH2AX免疫荧光
            3.10 统计学分析
        4 实验结果
            4.1 TRIP13过表达与膀胱癌预后不良相关
            4.2 敲低TRIP13抑制T24和J82细胞株生长并诱导凋亡
            4.3 过表达TRIP13促进T24和J82细胞株生长
            4.4 高表达TRIP13增强T24和J82细胞株的耐药性
            4.5 TRIP13通过抑制SAC信号和DNA损伤起到致癌作用
        5 讨论
    实验二: 新型小分子靶向化合物作用机制研究
        1 实验材料
            1.1 实验试剂
            1.2 主要耗材
            1.3 化合物
            1.4 细胞株及培养条件
            1.5 实验动物
        2 实验仪器
        3 实验方法
            3.1 小鼠皮下MM移植瘤模型的建立
            3.2 抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)
            3.3 细胞核蛋白和浆蛋白提取
            3.4 实时荧光定量PCR
            3.5 骨髓瘤小鼠模型的建立
            3.6 免疫印迹(Western-Blot)
            3.7 细胞增殖毒性检测
            3.8 细胞周期检测
            3.9 细胞凋亡检测
        4 实验结果
            4.1 VCP17、VCP20化合物的来源及结构
            4.2 VCP17、VCP20能抑制肿瘤细胞的活性
            4.3 VCP17、VCP20能将ARP1和H929细胞阻滞于G2/M
            4.4 VCP17、VCP20能诱导ARP1和H929细胞凋亡
            4.5 VCP17、VCP20能抑制NF-κB信号通路
            4.6 VCP17、VCP20能抑制RAW264.7细胞的分化
            4.7 VCP17、VCP20对多种细胞因子的影响
            4.8 VCP17、VCP20能抑制小鼠皮下移植瘤的生长
            4.9 VCP17、VCP20在骨髓瘤小鼠模型中的作用
            4.10 VCP17、VCP20联合硼替佐米(BTZ)抑制ARP1和H929细胞的增殖
        5 讨论
第三部分 总结展望
    课题结论
    不足与展望
参考文献
附录
攻读硕士期间取得的学术成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]浅谈中医体质与恶性肿瘤的关系[J]. 朱蕾,王庆全,陈豫.  内蒙古中医药. 2017(05)
[2]癌毒理论研究现状[J]. 李琦玮,于明薇,王笑民.  中医杂志. 2015(04)
[3]癌毒病机理论探讨[J]. 程海波.  中医杂志. 2014(20)
[4]中医平衡观在老年肿瘤防治中的指导意义[J]. 唐武军,郁仁存.  北京中医药. 2013(05)
[5]肿瘤中医认识探赜[J]. 张静远,赵娟,周春祥.  中华中医药杂志. 2010(09)
[6]周仲瑛教授“癌毒”学术思想探析[J]. 程海波,吴勉华.  中华中医药杂志. 2010(06)
[7]癌基因理论与中医对癌变机理认识新探[J]. 周小军,田道法.  中医药学刊. 2001(05)



本文编号：3651725