VEGFⅡ/GRP融合蛋白的构建、表达、纯化及其抗小鼠RM-1前列腺癌的作用研究

发布时间：2022-10-17 12:32

　　设计并构建一种含VEGF和GRP抗原表位的表达载体p ET28a-VEGFI-M2-GRP质粒,将其转化至大肠杆菌中,并对重组菌进行乳糖诱导表达,超声破碎,包涵体经洗涤、溶解、透析复性、离子交换层析等方法进行分离纯化后得到目的蛋白VEGFⅡ/GRP,Western blot鉴定。建立前列腺癌RM-1细胞的C57BL/6J小鼠皮下移植瘤模型,以VEGFⅡ/GRP作为疫苗进行免疫。观察荷瘤小鼠的肿瘤生长情况计算抑瘤率,比较各组血管生成数以及ELISA检测抗VEGF抗体浓度,并研究该蛋白疫苗的抗肿瘤生长作用和抗血管生成作用。结果显示:ELISA结果表明小鼠血清中抗VEGF抗体比NS组高（P＜0.05）,重组蛋白VG组与NS组相比抗血管作用显著（P＜0.05）。初步显示构建的重组蛋白有抑制肿瘤血管生长的作用。 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 菌种和质粒
    1.2 试剂
    1.3 动物和细胞株
2 方法
    2.1 VEGF I-M2-DPTGG和GRP6基因的获得
    2.2 重组表达载体的构建和鉴定
    2.3 融合蛋白的诱导表达
    2.4 融合蛋白的分离纯化
        2.4.1 包涵体的洗涤和溶解
        2.4.2 包涵体的复性
        2.4.3 DEAE-52阴离子交换层析
    2.5 融合蛋白的Western blot鉴定
    2.6 重组蛋白对小鼠前列腺癌RM-1的免疫治疗
        2.6.1 融合蛋白的作用研究
    2.7 血清中抗h VEGF抗体的ELISA检测
3 结果
    3.1 VEGF121I-M2-DPTGG和GRP6基因鉴定
    3.2 重组表达载体的鉴定
    3.3 VEGFⅡ/GRP融合蛋白的诱导表达
    3.4 融合蛋白的分离纯化
    3.5 融合蛋白的Western blot鉴定
    3.6 融合蛋白对肿瘤生长的影响
    3.7 融合蛋白对肿瘤血管的影响
    3.8 血清中抗h VEGF抗体的ELISA检测
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国前列腺癌发病现状和流行趋势分析[J]. 韩苏军,张思维,陈万青,李长岭.  临床肿瘤学杂志. 2013(04)
[2]以VEGF及VEGFR2为靶位的抗肿瘤血管生成主动免疫治疗的研究进展[J]. 王伟,殷小涛,田仁礼,阎瑾琦,高江平,于继云.  现代生物医学进展. 2013(08)



本文编号：3692075