应用基因修复技术治疗Kit w /Kit wv 不育小鼠的研究

发布时间：2023-12-09 12:19

　　原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)是最早期的生殖细胞,它最终产生雄性和雌性生殖细胞。精子发生(Spermatogenesis)是雄性生殖一个复杂的细胞分化过程,它主要包括三个主要阶段,即精原细胞的有丝分裂,精母细胞的减数分裂,精子细胞经过变态转变为精子。由球形精子细胞变态产生精子的过程,称为精子形成。原始生殖细胞形成障碍会导致出生后生殖腺中生殖细胞的减少甚至缺失,精子发生障碍将导致少、弱、畸形精子症和无精子症。多种原因都会引起生殖细胞形成和精子发生障碍,而较为常见的原因之一是基因突变。据世界卫生组织(WHO)评估,不孕不育已经威胁到全球约15%的育龄夫妇,也就是每6⁷对夫妇中有1对夫妇存在生殖障碍。我国近期调查结果显示国内不孕症患者约占已婚夫妇人数的10%,而且发病率呈上升趋势。其中男性不育患者已经占据人类不孕不育患者的一半左右。男性不育症的原因很多,主要原因包括生殖细胞形成异常和精子发生障碍等。基因突变会导致这两种问题的出现,进而导致精子功能缺陷从而引起雄性不育。虽然辅助生殖技术能帮助部分男性不育患者解决问题,但是对于基因突变导...

【文章页数】：126 页

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中文摘要
ABSTRACT
前言
实验材料与方法
    一.实验材料
        (一)实验动物
        (二)主要仪器设备
        (三)实验主要试剂与耗材
        (四)实验主要试剂及配制
    二.实验步骤与方法
        (一)Kit^w/Kit^wv小鼠ntESCs的建立及鉴定
        (二)TALENs修复Kit^w/Kit^wv ntESC Kit基因
        (三)修复前后Kit^w/Kit^wv ntESC体内生殖细胞分化
        (四) Kit^w/Kit^wv ntESCs的PGCLCs分化及鉴定
        (五) 修复后Kit^w/Kit^wv ntESCs分化来源的PGCLCs的精子发生检测
        (六)修复后Kit^w/Kit^wv ntESCs分化来源的精子功能检测
实验内容与结果
    一.Kit^w/Kit^wv小鼠TTFS来源的NTESCS建立及多能性检测
        (一)Kit^w/Kit^wv ntESCs系的建立
        (二)Kit^w/Kit^wv ntESCs基因组完整性及多能性检测
    二.Kit^w/Kit^wv NTESCS W位点的基因修复及体内生殖细胞特化的检测
        (一)利用TALENs对Kit^w/Kit^wv nt ESCs W位点进行基因修复
        (二)修复后Kit^w/Kit^wv ntESCs多能性检测
        (三)修复前后Kit^w/Kit^wv ntESCs体内生殖细胞分化能力的检测
    三.修复前后Kit^w/Kit^wv NTESCS体外生殖细胞分化及检测
        (一)Kit^w/Kit^wv ntESCs向EpiLCs的分化及检测
        (二)EpiLCs向PGCLCs的分化及检测
    四.修复后Kit^w/Kit^wv PGCLCS移植入Kit^w/Kit^wv小鼠睾丸中产生精子
    五.RFP标记的修复后Kit^w/Kit^wv PGCLCS睾丸移植后产生健康子代
        (一)构建RFP标记的PGCLCs
        (二)PGCLCs^RFP睾丸移植得到具有功能的配子
    六.不带标记的修复后Kit^w/Kit^wv PGCLCS白消安造模小鼠睾丸移植得到健康子代
讨论
    一.PGCLCS分化培养基中细胞因子起到最关键作用
    二.利用NTESCS作为生殖细胞的分化资源具有多项优势
    三.TALENS基因修复技术的优势及问题
    四.ESC及IPSC分化为原始生殖细胞体系建立的必要性
    五.ESC及IPSC分化来源的子代的检测
    六.利用人类多能干细胞和诱导多能干细胞进行生殖细胞特化的可行性
    七.建立体外减数分裂系统的必要性和可行性
参考文献
文献综述 生殖细胞体外基因编辑的研究进展
    一.生殖细胞体内分化的进程
        (一)PGCs命运调控相关的转录因子
        (二)PGCs特化相关信号通路
    二.生殖细胞体外分化的研究进展
        (一)生殖细胞分化在小鼠中的研究进展
        (二)人类胚胎干细胞和诱导多能干细胞生殖细胞分化的进展
    三.生殖细胞体外基因编辑研究进展
        (一)基因编辑技术的发展
        (二)基因编辑技术在生殖细胞中的应用
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3871562