低氧预处理的骨髓间充质干细胞对慢性肾衰竭大鼠肾脏的修复作用

发布时间：2017-05-24 06:11

  本文关键词：低氧预处理的骨髓间充质干细胞对慢性肾衰竭大鼠肾脏的修复作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨低氧预处理的骨髓源性间充质干细胞移植对5/6肾切除大鼠肾损伤的修复作用。方法:1、采用密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derivedmesenchymal stem cells,BMSC),倒置显微镜下观察细胞形态及生长过程,流式细胞仪检测其表面标志物进行鉴定,取第3-4代细胞用于实验。采用混合气体缺氧小室(1%O2+5%CO2+94%N2)低氧预处理(hypoxic preconditioning,HP)BMSC建立实验模型。实验分为3组:正常培养BMSC(对照组)、低氧预处理24h组(低氧24h组)、低氧预处理48h(低氧48h组),通过流式细胞术Annexin V-FITC/PI检测低氧预处理后各组细胞的凋亡情况;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹杂交(Western blot,WB)检测各组细胞HIF-1α、CXCR4、VEGF的表达情况;比较各组细胞抗凋亡能力和细胞因子的表达。2、采用分阶段5/6肾切除术建立大鼠慢性肾衰竭模型,将动物随机分为四组:Sham组(假手术组),Model组(5/6肾切除组),BMSC组(常氧培养BMSC移植组),hp-BMSC组(低氧预处理24h BMSC移植组),各组于5/6肾切除术后一周后分别经阴茎背静脉注射PBS、PBS、BMSC、hp-BMSC细胞悬液。于注射后1周、3周、6周处死各组大鼠,留取血清和肾组织,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr),并观察肾脏病理变化。同时,以Dio绿荧光染料体外标记BMSC,比较常氧培养BMSC和缺氧预处理BMSC移植后向肾脏归巢的数量差异。结果:1、原代细胞呈短梭形、椭圆形,贴壁集落生长,经3次传代后,细胞大小及形态趋于一致,细胞呈长梭形或放射状生长。流式细胞术显示对照组细胞早期和晚期均未见凋,与常规培养(对照组)组细胞比较,低氧预处理24h(低氧24h)组细胞早期和晚期凋亡率无明显差别,随着细胞缺氧时间的延长,低氧预处理48h(低氧48h)组的早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡数量均显著增多(P0.05);RT-PCR及WB显示,与对照组和低氧48h组相比,低氧24h组HIF-lα、CXCR4、VEGF的表达明显增高(P0.05),而对照组组和低氧48h组比较,HIF-lα、CXCR4、VEGF的表达未见明显差别。2、在各时间点,Model组大鼠BUN、Scr水平均高于Sham组(P0.05);BMSC组和hp-BMSC组BUN、Scr水平均较Model组降低(P0.05);与BMSC组比较,hp-BMSC组BUN和Scr在第6周降低更显著(P0.05)。荧光定位显示在hp-BMSC组存活的BMSC明显多于BMSC组。细胞移植后,两组大鼠肾脏病理损伤均较Model组减轻,而hp-BMSC组较BMSC组治疗效果更明显。结论:低氧预处理的BMSC可提高BMSC抗凋亡能力,并可促进BMSC向受损肾脏组织迁移归巢、延长细胞在肾脏内的定植时间,更有效改善慢性肾衰竭大鼠肾功能和修复受损的肾组织。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 低氧预处理 细胞移植 慢性肾衰竭
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692.5
【目录】：

• 英文缩略表4-5
• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 第一部分: 大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及低氧预处理模型的建立10-30
• 一 材料与方法10-20
• 二 结果20-30
• 第二部分:低氧预处理骨髓间充质干细胞移植对 5/6 肾切除大鼠肾损伤修复能力的影响30-42
• 一 材料与方法30-35
• 二 结果35-42
• 讨论42-47
• 结论47-48
• 参考文献48-55
• 综述55-63
• 参考文献59-63
• 致谢63

【参考文献】

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1 李秀森,郭子宽,杨靖清,刘晓丹,侯春梅,唐佩弦,毛宁;骨髓间充质干细胞的生物学特性[J];解放军医学杂志;2000年05期

2 郭琦;万建新;梁萌;;急性肾损伤微环境上调骨髓间充质干细胞分泌肾脏保护性生长因子[J];中国中西医结合肾病杂志;2009年06期

3 王瑞强;王毅;蒲娟娟;李涛;刘闯;;大鼠慢性肾衰竭模型的建立及体会[J];医药论坛杂志;2011年19期

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本文编号：389973