肾脏缺血再灌注期间乙醛脱氢酶2的表达变化以及miR-146a对其调控机制

发布时间：2017-05-24 16:08

  本文关键词：肾脏缺血再灌注期间乙醛脱氢酶2的表达变化以及miR-146a对其调控机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:器官移植的缺血过程不可避免,再灌注又会给器官带来的二次损伤,这是各种临床治疗方法的矛盾所在,其复杂的发生机制使其进一步研究处于瓶颈。ALDH2是目前发现的在人体中具有重要作用的一种酶,其在多种器官IR中的保护作用已被证实。而在肾脏IR中的作用有待证实。另有研究发现,mi R-146a可通过对ALDH2的转录后调控,在心脏、小肠的IR损伤中发挥保护作用。因此,我们希望通过本实验初步探讨ALDH2在肾脏IR中的作用,以及mi R-146a对ALDH2的调控作用及其可能的调控机制。为进一步研究ALDH2在肾脏I/R中的作用提供理论依据。方法:第一部分为体内实验,采用雄性C57BL/6J(H-2Kb)小鼠,8-10周龄,夹闭双肾肾蒂30min制作缺血再灌注损伤模型,各个时间点下腔静脉取血及双肾,HE染色观察肾脏病理损伤情况,检测血液肌酐水平,RT-PCR检测ALDH2及mi R-146a表达,Western Blot检测ALDH2蛋白表达。第二部分为体外实验,采用雄性C57BL/6J(H-2Kb)小鼠,8-10周龄。分离提纯小鼠肾小管上皮细胞及腹腔巨噬细胞,石蜡油法模拟I/R损伤,10u M H2O2模拟氧化应激状态,各时间点Trizol法提取细胞RNA,RT-PCR检测ALDH2及mi R-146a表达。结果:小鼠肾脏热缺血IR后3h,ALDH2表达迅速上调,随后逐渐下降,IR后12h恢复到接近假手术组水平。mi R-146a在IR后3小时表达显著升高,随后上调幅度逐渐缩小,至IR后72小时,mi R-146a表达仍为对照组的3.7±0.7倍。肾脏缺血再灌注后1h,ALDH 2蛋白迅速减少,并于3h降至最低,随后逐渐升高,12h蛋白水平仍明显低于对照组,24h达到顶峰后逐渐下降。与假手术组相比,IR 1h、3h、6h、12h组ALDH-2蛋白表达显著减少(P0.01或P0.001);IR 24h、72h组ALDH-2蛋白表达显著增加(P0.001)。TEC:IR后3h,ALDH-2表达显著升高,随后逐渐降低,刺激后24小时ALDH-2表达仍显著高于对照组;IR后3h,mi R-146a表达显著降低;随后逐渐升高,刺激后24小时mi R-146a表达显著升高,约为对照组的4.2±0.8倍;H2O2刺激后3h,ALDH-2表达显著升高,随后逐渐降低,刺激后24小时ALDH-2表达仍显著高于对照组;H2O2刺激后6h内,mi R-146a表达无明显变化,刺激后24小时mi R-146a表达显著升高,约为对照组的2.7±0.7倍。MΦ:IR后3h ALDH-2表达水平即显著升高,刺激后24小时ALDH-2表达约为对照组的4.2±0.8倍;IR后,原代MΦ的mi R-146a表达水平无显著变化;H2O2刺激后6h,ALDH-2表达水平显著升高,刺激后24小时约为对照组的5.2±0.9倍;H2O2刺激后3h,mi R-146a表达即开始上调,刺激后24小时mi R-146a表达约为对照组的5.7±1.2倍。结论:我们的研究结果表明在构建的小鼠肾脏I/R模型中,肾脏组织ALDH2 m RNA表达迅速升高,ALDH2蛋白早期降低,随后逐渐升高;mi R-146a体内实验显示在I/R早期表达迅速上调;体外细胞实验发现,I/R后及H2O2刺激后ALDH2表达均迅速上调,而mi R-146a表达在早期降低,6h后逐渐升高,与体内实验结果不一致;mi R-146a有望成为肾脏I/R损伤的早期诊断标记。
【关键词】：乙醛脱氢酶2 mi R-146a 缺血再灌注 肾移植 肾小管上皮细胞
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-12
• 第一部分 小鼠肾脏缺血再灌注期间ALDH2及miR-146a的表达12-25
• 1 材料与方法13-19
• 1.1 实验材料13-16
• 1.2 实验方法16-19
• 2 结果19-23
• 2.1 小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型制作成功19-21
• 2.2 小鼠肾脏IR后ALDH2与miR-146a表达上调21-22
• 2.3 小鼠肾脏IR后ALDH2蛋白表达有明显变化22-23
• 3 讨论23-25
• 第二部分 小鼠原代肾小管上皮细胞及腹腔巨噬细胞缺血再灌注期间ALDH2及miR-146a的表达25-31
• 1 材料与方法25-28
• 1.1 实验材料25-26
• 1.2 实验方法26-28
• 1.3 统计方法28
• 2 结果28-30
• 2.1 小鼠原代TEC在IR及H_2O_2刺激后ALDH2表达上调28-29
• 2.2 小鼠原代Mφ在IR及H_2O_2刺激后ALDH2表达上调29
• 2.3 小鼠原代TEC在IR及H_2O_2刺激后miR-146a表达上调29-30
• 2.4 小鼠原代Mφ在IR及H_2O_2刺激后miR-146a表达上调30
• 3 讨论30-31
• 结论31-32
• 参考文献32-36
• 综述36-42
• 参考文献39-42
• 致谢42-44
• 在学期间参与的科研课题与研究成果44-45
• 个人简历45-46

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本文编号：391283