补体片段C3a在足细胞表型转化中的作用

发布时间：2017-05-26 20:03

  本文关键词：补体片段C3a在足细胞表型转化中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨C3a对条件永生化温度敏感小鼠足细胞表型转化的影响。方法:分别用0.001μM、0.003μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM C3a刺激分化成熟足细胞24小时,用RT-PCR检测synaptopodin、podocin、nephrin、CD2AP、FSP-1、α-SMA、vimentin和I型胶原m RNA的表达。用Western Blot检测nephrin、podocin、CD2AP、FSP-1和α-SMA蛋白的表达。用免疫组化和免疫荧光检测podocin、CD2AP、synaptopodin、FSP-1、vimentin和α-SMA蛋白表达和分布。结果:1、未分化足细胞呈铺路石样外观,37℃无IFN-γ培养7-14天足细胞表达synaptopodin,足细胞分化成熟,细胞变大,并伸出突起。2、免疫组化和免疫荧光:分化成熟足细胞表达synaptopodin、podocin和CD2AP。0.1μM C3a刺激24h后,synaptopodin、podocin和CD2AP表达减少。分化成熟足细胞也有少量FSP-1、α-SMA、vimentin表达,0.1μM C3a刺激24h后,FSP-1、α-SMA和vimentin的表达增加。3、RT-PCR结果:与对照组相比,随着C3a浓度的增加synaptopodin、podocin、CD2AP和nephrin的m RNA表达减少,而FSP-1、α-SMA、vimentin和I型胶原m RNA逐渐增加。随着C3a浓度(0.001-0.1μM)的增加,synaptopodin表达减少(P0.05);(0.003-0.1μM C3a与0.001μM C3a;0.03-0.1μM C3a与0.003-0.01μM C3a相比)synaptopodin表达减少(P0.05)。(0.03-0.1μM C3a与0-0.01μM C3a;0.1μM C3a与0.03μM C3a相比)podocin m RNA表达明显减少(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a与0-0.003μM C3a;0.03-0.1μM C3a与0.01μM C3a;0.1μM C3a与0.03μM C3a相比)CD2AP和nephrin m RNA表达明显减少(P0.05)。随着C3a浓度(0.001-0.1μM)的增加FSP-1的表达增加(P0.05);(0.003-0.1μM C3a与0.001μM C3a;0.1μM C3a与0.003-0.03μM C3a)FSP-1 m RNA表达明显增加(P0.05)。随着C3a浓度(0.001-0.1μM)的增加α-SMA m RNA表达明显增加(P0.05);(0.003-0.1μM C3a与0.001μM C3a;0.01-0.1μM C3a与0.003μM C3a相比)α-SMA m RNA表达明显增加(P0.05)。随着C3a浓度(0.003-0.1μM)的增加vimentin m RNA表达明显增加(P0.05);(0.01-0.1μM C3a与0.003μM C3a相比)vimentin m RNA表达明显增加(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a与0-0.003μM C3a;0.03μM C3a与0.01μM C3a;0.1μM C3a与0.03μM C3a相比)Collagen I m RNA表达明显增加(P0.05)4、Wenstern blot结果:与对照组相比,随着C3a浓度增加,足细胞的podocin、CD2AP和nephrin蛋白表达减少,FSP-1和α-SMA蛋白表达增加。(0.01-0.1μM C3a与对照组;0.03-0.1μM C3a与0.1μM C3a相比)nephrin蛋白表达明显减少(P0.05)。随着C3a浓度(0.01-0.1μM)的增加podocin蛋白表达明显减少(P0.05)。(0.03-0.1μM C3a与0-0.01μM C3a;0.1μM C3a与0.03μM C3a相比)CD2AP表达明显减少(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a与对照组;0.1μM C3a与0.01-0.03μM C3a相比)FSP-1表达明显增加(P0.05)。(0.01-0.1μMC3a与对照组;0.03-0.1μMC3a与0.01μMC3a相比)α-SMA表达明显减少(P0.05)。结论:1、体外培养的成熟足细胞已经发生上皮-间充质细胞转分化。2、补体片段C3a可进一步促进体外培养的小鼠足细胞表型转化,表现为随着C3a浓度的增加nephrin、podocin、CD2AP和synaptopodin的表达减少,而FSP-1、α-SMA,vimentin,I型胶原表达上调。
【关键词】：C3a 足细胞 上皮-间充质细胞转分化
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692.5
【目录】：

• 英文缩略表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料11-15
• 1 实验对象11
• 2 实验试剂11-12
• 3 主要仪器和耗材12-13
• 4 主要试剂配制13-15
• 方法15-24
• 1 小鼠足细胞的培养15-16
• 2 足细胞分化成熟的鉴定16-17
• 3 实验分组和干预17
• 4 足细胞的形态学观察17-18
• 5 足细胞总RNA提取和目的m RNA的RT-PCR18-21
• 6 Western blot检测足细胞目的蛋白表达21-23
• 7 统计学处理23-24
• 结果24-43
• 1 足细胞的形态学24
• 2 免疫组化和免疫荧光结果24-29
• 3 RT-PCR检测各实验组足细胞m RNA的表达29-37
• 4 Western blot检测各组目的蛋白的表达37-43
• 讨论43-47
• 结论47-48
• 参考文献48-52
• 综述52-64
• 参考文献59-64
• 致谢64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 申兵冰;张杰;;Synaptopodin与肾小球疾病的研究进展[J];海南医学;2006年05期

2 彭翔;李瑛;;足细胞向间充质细胞转分化的研究[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2010年06期

  本文关键词：补体片段C3a在足细胞表型转化中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：397912