Pim1通过调节核糖体生物合成影响前列腺癌发生发展的研究

发布时间：2017-05-26 17:08

  本文关键词：Pim1通过调节核糖体生物合成影响前列腺癌发生发展的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的明确Pim1对前列腺癌细胞的核糖体生物合成的影响,并初步揭示其作用机制方法通过构建Pim1 shRNA,并用其转化感受态细胞,经扩增后提取高浓度质粒,随后用Pim1 shRNA转染PC3细胞,通过含有嘌呤霉素的培养基筛选后,行单克隆细胞培养,即得到稳定的转染株;分别应用实时定量qPCR及蛋白质免疫印迹技术检测转染后细胞中Pim1的mRNA表达量以及蛋白水平;运用蔗糖梯度离心技术分离前列腺癌PC3细胞系的核糖体,并提取各层离心产物的蛋白质成分,利用Westernblot检测Pim1的分布规律,了解其与核糖体各亚基是否存在相互作用关系;使用蔗糖梯度离心技术分别分离PC3、Pim1低表达PC3细胞系及Pim1低表达阴性对照PC3细胞系的核糖体,利用UV检测器检测核糖体各亚基的含量在3种细胞系中的差异;进一步运用RT-qPCR检测在受影响亚基中具体受影响的核糖体蛋白。所有需要统计分析的实验数据全部使用统计软件SPSS18.0进行分析。结果1.Pim1 shRNA转化的感受态细胞在扩增后提取获得了高浓度的Pim1shRNA;通过Lipofectamine2000介导将Pim1 shRNA成功转染入PC3细胞,通过嘌呤霉素培养筛选及单克隆细胞培养,RT-qPCR及westernblot检测单克隆细胞株中Pim1稳定低表达;2.蔗糖梯度离心及Westernblot检测发现Pim1的分布与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的分布密切相关,而与核糖体60S大亚基的分布无关,其差别具有统计学意义;3.蔗糖梯度离心及UV检测器检测发现Pim1低表达时,核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的表达降低;RT-qPCR检测发现,Pim1低表达时,核糖体40S小亚基的RPS6、RPS21的表达水平降低。结论1.Pim1的分布与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的分布密切相关,而与核糖体60S大亚基的分布无关,其差别具有统计学意义,表明Pim1可与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体相互作用;2.Pim1低表达时,核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的表达降低;RT-qPCR检测发现,Pim1低表达时,核糖体40S小亚基的RPS6、RPS21的表达水平降低。表明Pim1可以通过影响核糖体小亚基中RPS6、RPS21的表达,影响核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的生物合成,影响了前列腺癌的发生发展。
【关键词】：前列腺癌 Pim1 核糖体生物合成
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略语/符号说明9-11
• 前言11-16
• 研究现状、成果11-15
• 研究目的、方法15-16
• 对象和方法16-35
• 结果35-44
• 讨论44-49
• 结论49-50
• 参考文献50-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 综述 Pim1作为肿瘤治疗靶点的研究进展57-77
• 综述参考文献67-77
• 致谢77

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本文编号：397509