TLR4/NLRP3炎症复合体介导对比剂诱导的肾小管上皮细胞炎症和损伤

发布时间：2024-06-10 18:14

　　目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症复合体是否介导了对比剂(CM)引起的肾小管上皮细胞炎症和损伤。方法:本研究运用碘普罗胺作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立损伤模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot测定TLR4、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平;ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的水平;Hoechst 33258核染色法检测凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位。用小干扰RNA沉默NLRP3表达。结果:CM可降低NRK-52E细胞的存活率并上调cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05);此外,CM可上调细胞TLR4/NLRP3炎症复合体的表达并促进炎症因子IL-1β和IL-18的分泌(P<0.05)。沉默NLRP3可以对抗CM诱导的炎症因子分泌;TLR4抑制剂TAK-242及沉默NLRP3能减轻CM引起的细胞凋亡和线粒体功能损伤。结论:TLR4/NLRP3炎症复合体参与了CM致急性肾...

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【文章目录】：
材料和方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 细胞培养
        2.2 损伤模型的建立及实验分组
        2.3 CCK-8法测定细胞存活率
        2.4 Western blot检测TLR4、NLRP3、ASC、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平
        2.5 ELISA法检测炎症因子IL-1β和IL-18的分泌水平
        2.7 Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的数量
        2.8 JC-1染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位 (mitochondrial membrane potential, MMP)
    2.6 siRNA沉默NLRP3的表达
    3 统计学处理
结果
    1CM降低NRK-52E细胞的存活率并上调cleaved caspase-3的蛋白水平
    2 CM上调NRK-52E细胞TLR4及NLRP3炎症复合体的表达
    3 CM促进NRK-52E细胞炎症因子IL-1β和IL-18的分泌
    4 siRNA下调NRK-52E细胞内NLRP3的表达
    5 沉默NLRP3对抗CM诱导的炎症因子IL-1β和IL-18的分泌
    6 TAK-242及沉默NLRP3能减轻CM引起的NRK-52E细胞凋亡
    7 TAK-242及沉默NLRP3能减轻CM诱导的NRK-52E细胞线粒体功能损伤
讨论



本文编号：3991713