PKCδ对高葡萄糖诱导的HK-2细胞p66Shc磷酸化及线粒体转位的影响

发布时间：2024-12-11 03:24

　　目的 观察高葡萄糖刺激下人肾小管上皮细胞(HK-2)中PKCδ和p66Shc的mRNA表达及蛋白磷酸化水平。研究PKCδ对高葡萄糖刺激下HK-2细胞p66Shc磷酸化及线粒体转位的影响。 方法 1、以HK-2细胞作为体外观察的细胞,采用不同浓度和同一浓度不同时间葡萄糖刺激HK-2细胞,分别用Real Time PCR和Western Blot技术,检测PKCδ和p66shc基因及蛋白磷酸化水平。 2、①用PKCδ抑制剂对HK-2细胞进行干预,用或不用高葡萄糖处理后,采用Western blot和细胞免疫荧光技术分析p66Shc蛋白磷酸化水平；②经上述方法处理细胞后,分别提取细胞浆与线粒体蛋白,用Western blot观察磷酸化p66Shc蛋白线粒体转位情况。 结果 1、高葡萄糖刺激下PKCδ和p66Shc的mRNA表达及蛋白磷酸化水平较对照组明显增加(P<0.05),且呈剂量和时间依赖。 2、用PKCδ抑制剂Rottlerin处理HK-2细胞后,与对照组相比,高糖刺激下胞浆和线粒体p66Shc磷酸化水平明显抑制(#P<0.01)。 结论 ...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
英文縮略词
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞及来源
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与传代
        2.2.2 细胞冻存与复苏
        2.2.3 细胞干预
        2.2.4 基因水平检测
        2.2.5 肾小管上皮细胞(HK-2)中p66Shc、p66Shc phospho-S36蛋白的检测
        2.2.6 细胞免疫荧光
        2.2.7 统计学分析
3 结果
    3.1 不同浓度葡萄糖刺激对HK2细胞p66Shc和PKCδ的mRNA表达的影响
    3.2 30mM葡萄糖不同时间段刺激对HK2细胞p66Shc和PKCSmRNA的影响
    3.3 不同浓度葡萄糖刺激对HK2细胞p66Shc和PKCδ磷酸化的影响
    3.4 30mM葡萄糖不同时间段刺激对HK2细胞p66Shc和PKCδ磷酸化的影响
    3.5 PKCδ抑制剂对高葡萄糖作用下HK-2细胞p66Shc磷酸化及线粒体转位的影响
        3.5.1 Rottlerin对高糖作用下HK-2细胞p66Shc磷酸化水平的抑制作用
        3.5.2 Rottlerin对高葡萄糖作用下HK-2细胞p-p66Shc线粒体转位的影响
4 讨论
5 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间主要研究成果
致谢



本文编号：4016107