舒尼替尼通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导肾癌细胞自噬

发布时间：2024-12-27 05:22

　　 目的:研究舒尼替尼引起的肾癌细胞出现细胞自噬的机制。方法:以肾癌细胞系ACHN细胞为细胞模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,innersalt,MTS]检测法观察舒尼替尼对ACHN细胞活性的影响;应用RNA干扰技术敲降自噬相关蛋白Beclin1和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(microtubule associated protein1 light chain 3 fusion protein,LC3)检测自噬与舒尼替尼引起的细胞凋亡。使用电子显微镜和荧光显微镜观察在舒尼替尼作用下自噬体的形成;蛋白质免疫印迹检测舒尼替尼对LC3-Ⅱ的积累,自噬相关信号通路蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、哺乳动物雷帕霉素受体(mammalian target of rapamycin,m TOR)及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly AD...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞和质粒
    1.2 药品和抗体
    1.3 仪器设备
    1.4 试剂耗材
    1.5 细胞培养
    1.6 siRNA干扰
    1.7 细胞质粒转染
    1.8 电子显微镜样品的制备
    1.9 荧光显微镜观察
    1.1 0 蛋白质免疫印迹
    1.1 1 MTS检测细胞存活率
    1.1 2 统计学分析
2 结果
    2.1 舒尼替尼引起细胞活性丢失,该作用与细胞自噬有关
    2.2 舒尼替尼诱导ACHN细胞自噬增强
    2.3 舒尼替尼通过抑制Akt/m TOR通路诱导肾癌细胞自噬
3 讨论



本文编号：4021197