Clusterin在人类男性生殖系统中的表达研究

发布时间：2025-01-14 03:25

　　第一部分正常男性精子中Clusterin的起源和定位 目的：哺乳动物精液中的clusterin是一种具有异源二聚体结构的分泌型蛋白，主要由附睾和精囊分泌。当前认为clusterin主要存在于异常精子表面，与精子活力下降、精子聚集以及男性不育等相关。然而，关于人类正常精子中clusterin的相关研究较少。本实验旨在系统地研究人类正常精子中clusterin的起源和定位问题。 方法：收集8名男性的正常新鲜精液标本，采用非连续密度梯度离心法分离纯化出高活力的正常精子。分别采用western免疫印迹法和免疫荧光技术检测clusterin在正常精子中的表达和定位；运用western免疫印迹法和免疫组化方法研究clusterin在人类睾丸中的分布特点。 结果：本研究发现，天然的clusterin定位于正常精子的质膜内部。它起源于睾丸曲细精管中的晚期生精细胞，与分泌型clusterin有着相似的分子量和异源二聚体结构。 结论：人类正常精子中的clusterin可能在精子发生的终末阶段由自身合成。Clusterin在正常精子表面不同以往的分布和起源特点表明，与异常精子表面传统的分泌型c...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1免疫印迹法检测在不同蛋白处理方式下人类精子中clusterin的表达特点

本：按上述方法提取的疏水膜蛋白和亲水性胞质蛋白，分别经非还原性或还原性上样缓冲液煮沸后，用免疫印迹法检测对比其表达特点。如图所示，还原剂处理后的疏水膜蛋白中检测到分子量约为40KDa的clusterin蛋白条带（图1，第1泳道），未用还原剂处理的疏水膜蛋白中检测到分子量约80KD....

图2采用免疫荧光染色法检测clusterin在人类精子中的定位a-b：经分离纯化但未渗透化处理的精子，一抗孵育；c-d：经分离纯化且渗透

子量约为40kDa和80kDa的蛋白条带（图1，第7-8泳道）。2.免疫荧光法检测clusterin在正常精子中的定位：（1）percoll提纯的精子标本：如图2a-b所示，精子膜表面未检测到明显的荧光信号。经渗透化处理后，精子头部，尤其是顶体后区出现了明显的荧光染色（图2c....

图3免疫印迹法检测人睾丸组织中clusterin蛋白的表达情况

3．采用免疫印迹法检测人睾丸组织中clusterin的表达：经还原剂处理的睾丸蛋白样品中，通过免疫印迹法检测到三种分子量的蛋白条带，分别为40KDa、50KDa以及60KDa（图3，第1泳道）；未经还原剂处理的睾丸蛋白中仅检测到分子量分别为80KDa及大于130KDa的蛋白条带（....

图4clusterin在人睾丸中定位的免疫组化分析

27图4clusterin在人睾丸中定位的免疫组化分析a-c：clusterin一抗孵育，红色箭头指明了典型的管周肌样细胞、Sertoli细胞、未成熟的精子以及间质细胞；精原细胞中没有阳性表达（绿色箭头）d：正常IgG替代一抗孵育，作为对照组。放大倍数：a为100倍，b和d为....

本文编号：4026332