CCN3对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞胞外基质代谢的影响

发布时间：2017-06-10 11:05

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【摘要】：目的：肾小球硬化是慢性肾脏病进展的重要机制,也是终末期肾衰形成的主要原因,其特征是肾小球系膜细胞增生、细胞外基质大量沉积。近年来研究证实,肾母细胞瘤过度表达蛋白(Nephroblastoma overexpressed gene, CCN3/NOV)具有抑制纤维化的作用,但是其对肾小球硬化的影响尚不清楚。本实验旨在探讨CCN3对肾小球系膜细胞胞外基质沉积的影响,为防治肾小球硬化和CKD进展提供新的思路。方法：1、体外培养人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell, HMC),使用不同浓度(0、0.5、1.0、2.0ng/m、1)转化生长因子β1 (Transforming growth factor-β1, TGF-β1)作用HMC 24h,并且使用终浓度为2.0ng/ml的TGF-β1干预HMC不同时间(0、12、2、48 hour),运用Western blot技术检测细胞CCN3蛋白表达情况。2、在无血清培养基中加入TGF-β1(2.0ng/ml)1小时前,外源性给予不同浓度(5ng/ml,50ng/ml,500ng/ml) CCN3干预人肾小球系膜细胞或建立高表达CCN3质粒瞬时转染人肾小球系膜细胞,具体分组如下：空白对照组、TGF-β1干预组(2ng/ml)、CCN3 (5ng/ml)+TGF-β1干预组、CCN3 (50ng/ml)+TGF-β1干预组、CCN3(500ng/ml)+TGF-β1干预组、TGF-β1+CCN3质粒干预组、TGF-β1+空白质粒干预组、CCN3质粒干预组、空白质粒干预组。Real Time-PCR技术检测各组纤连蛋白(Fibronectin, FN)、I型胶原蛋白(Type I collagen, COLI)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases-9, MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1) mRNA表达情况,Western blot技术检测各组FN、COLI、 MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜技术检测各组FN、COLI的表达情况。结果：(1)TGF-β1可抑制HMC CCN3蛋白的表达,呈浓度和时间依赖性(终浓度为2.0ng/ml作用24小时抑制作用最强)(P0.05)。(2)与正常对照组相比,TGF-β1组细胞FN及COLI蛋白及RNA表达明显增加(P0.05),TGF-β1刺激前1小时给予不同浓度CCN3重组蛋白干预后可显著抑制TGF-β1诱导的上述指标的表达(P0.05)。其中,在CCN3浓度为5ng/ml时即可显著抑制COLI及FN的表达,抑制效应呈浓度依赖性；(3)与正常对照组相比,TGF-β1组MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA水平显著降低(P0.05),TIMP-1蛋白及mRNA水平显著升高(P0.05),TGF-β1刺激前1小时给予不同浓度CCN3重组蛋白干预后,MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表达均较TGF-β1干预组显著上调而TIMP-1蛋白及mRNA表达较TGF-β1干预组显著下调(P0.05)。(4)与TGF-β1组相比,内源性转染pcDNA-3.1 (+)-CCN3质粒+TGF-β1干预组FN、COL1及TIMP-1蛋白及mRNA的表达均显著降低,MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表达显著升高,差异具有统计学意义(P0.05、P0.01)。结论：CCN3可通过抑制HMC胞外基质的生成及促进HMC胞外基质降解抑制胞外基质的沉积,在肾小球硬化的防治中具有潜在的应用价值。
【关键词】：CCN3 TGF-β1 MMP 肾脏纤维化 肾小球硬化
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 缩略词10-12
• 前言12-14
• 文献综述 CCN3与纤维化14-19
• 第一部分 外源性CCN3对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞胞外基质代谢的影响19-42
• 实验材料和方法19-34
• 研究内容34-36
• 研究结果36-42
• 第二部分 内源性CCN3对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞胞外基质代谢的影响42-57
• 实验材料和方法42-47
• 研究内容47-48
• 研究结果48-57
• 讨论57-61
• 结论61-62
• 致谢62-63
• 参考文献63-66
• 附录66

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1 张莹,张郁,孙叶方,史俊南;TGF-β对人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;1999年04期

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4 邹贵勉,张t

本文编号：438224