西罗莫司抑制肾移植后AGEs诱导动脉粥样硬化形成的作用及其机制

发布时间：2017-06-10 21:16

  本文关键词：西罗莫司抑制肾移植后AGEs诱导动脉粥样硬化形成的作用及其机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导VSMCs向成骨样细胞表型转分化的相关分子机制及肾移植术后西罗莫司对AGEs诱导的VSMCs向成骨样细胞表型转分化的作用及相关分子机制。。方法:体外分离和培养原代SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs),进行细胞传代至第4~6代,采用光学显微镜观察细胞形态及间接免疫荧光染色法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达以鉴定细胞是否具有VSMCs特性。取第5代SD大鼠胸主动脉VSMCs为体外实验对象,用200 mg/L的AGEs或BSA分别作用VSMCs细胞不同时间(0h~12d);此外,部分细胞以2.0ug的pc DNA3.1或整合素链激酶(ILK)质粒转染24h,或以抗AGE受体(RAGE)抗体预处理12h后,再予200 mg/L的AGEs或BSA处理9d,收集细胞,用蛋白质印迹法检测SD大鼠胸主动脉VSMCs上α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)、ILK的表达变化,并以甲-酚酞络合酮方法检测该细胞中钙离子浓度的变化。同样进行体外分离和培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),以第5代大鼠主动脉VSMCs为体外实验对象,根据处理方式的不同将细胞分为:西罗莫司组(西罗莫司处理)、AGEs组(AGEs处理)、西罗莫司+AGEs组(西罗莫司和AGEs共处理)及对照组(溶剂处理)。SD大鼠胸主动脉VSMCs经10nm西罗莫司和或200mg/L AGEs处理9d后,收集细胞s,采用蛋白质印迹法检测VSMCs中α-SMA、OPN、碱性磷酸酶(ALP)、增殖细胞核抗原(PCNA)和整合素链激酶(ILK)的表达;并以甲-酚酞络合酮方法检测细胞钙离子浓度。结果:光学显微镜下显示第4~6代SD大鼠胸主动脉VSMCs的细胞形态与原代细胞无明显差别;间接免疫荧光染色结果也显示其α-SMA的表达强度与原代细胞相似。体外实验结果表明:AGEs作用后SD大鼠胸主动脉VSMCs中α-SMA的表达呈时间依赖性减少;同时,OPN表达呈时间依赖性增加;且钙离子浓度也具有AGEs浓度依赖性增加趋势(P0.05)。此外,与对照组相比,以AGEs处理SD大鼠胸主动脉VSMCs6h后,该细胞中ILK的表达显著增加,在12h达高峰,24h始开始下降(P0.05);与转染空白质粒载体(pc DNA3.1)的SD大鼠胸主动脉VSMCs相比,以野生型ILK质粒转染细胞上调ILK表达后,可使该细胞中α-SMA的表达明显下降;而OPN表达则显著增加,进一步以AGEs作用此类细胞后,则使α-SMA表达进一步降低,OPN表达进一步增加。而以抗RAGE中和抗体预处理细胞后,可抑制AGEs诱导的ILK表达增加(P0.05)。我们实验还显示AGEs可抑制SD大鼠胸主动脉VSMCs中a-SMA表达;诱导OPN、PCNA和ILK的表达上调、并使细胞中ALP表达及钙离子浓度明显增加(P0.05);而与AGEs组相比,西罗莫司预处理细胞后则可抑制AGEs介导的上述效应(P0.05)。结论:AGEs可能通过与其受体——RAGE结合后激活ILK相关细胞内信号通路进而引起VSMCs向成骨样细胞表型转分化;而西罗莫司可能通过抑制ILK表达进而抑制AGEs诱导的VSMCs发生向成骨样细胞表型转分化以及抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,从而抑制肾移植术后动脉粥样硬化的发生/进展,并改善肾移植术后心血管疾病(CVD)的发生率。
【关键词】：肾移植术后 动脉粥样硬化 晚期糖基化终末产物 大鼠胸主动脉平滑肌细胞 成骨样细胞 转分化 西罗莫司 整合素链激酶
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R699.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 第一部分：晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导VSMCs向成骨样细胞表型转分化的相关分子机制研究9-38
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-26
• 结果26-33
• 讨论33-35
• 结论35-36
• 参考文献36-38
• 第二部分：西罗莫司对AGEs诱导的VSMCs向成骨样细胞表型转分化作用的影响及相关分子机制研究38-54
• 中文摘要38-39
• 英文摘要39-40
• 前言40-41
• 材料和方法41-43
• 结果43-49
• 讨论49-51
• 结论51-52
• 参考文献52-54
• 综述54-67
• 参考文献62-67
• 附录1 缩略语67-69
• 附录2 攻读学位期间发表文章情况69-70
• 致谢70

【共引文献】

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本文编号：439951