MKP-1在肾透明细胞癌中的表达及功能研究

发布时间：2017-06-19 11:18

  本文关键词：MKP-1在肾透明细胞癌中的表达及功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：近年来大量研究证明丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)的表达水平与多种肿瘤的发生、进展以及预后密切相关。有学者报道MKP-1在乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌等不同类型的肿瘤中表达异常,且发挥不同的作用,然而MKP-1在肾透明细胞癌中的表达及其作用机制研究鲜有报道。本实验主要就MKP-1在肾透明细胞癌及其癌旁组织中的表达情况以及与临床病理资料的关系进行研究,在肾透明细胞癌细胞系中过表达和敲低MKP-1基因,探究其对细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：①采用蛋白免疫印迹(western-blot)以及免疫组化方法检测MKP-1蛋白在肾透明细胞癌及其癌旁组织中的表达情况,通过实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测100例肾透明细胞癌组织中MKP-1的mRNA表达水平并分析其与临床病理资料的相关性。②通过实时定量PCR和western-blot方法检测肾透明细胞癌细胞系A498、Caki-1、786-0以及正常肾小管上皮细胞系HKC、HK2中MKP-1的表达。③构建过表达和敲低MKP-1的慢病毒质粒,培养稳定高表达和低表达MKP-1的A498肾癌细胞系以及低表达MKP-1的Caki-1肾癌细胞系。④通过MTS方法检测各稳转细胞株的增殖情况,采用划痕实验和transwell实验验证其迁移和侵袭能力的变化。结果：①在mRNA水平,MKP-1在肾癌组织中的表达均较其癌旁组织高(P0.001),在蛋白水平,western-blot和免疫组化均有相同的趋势;在100例肾癌组织中MKP-1的mRNA表达水平与肿瘤的大小(P=0.010)、肿瘤的T分期(P=0.041)呈正相关,与年龄(P=0.457)、性别(P=0.363)、BMI(P=0.476)、Fuhrman核分级(P=0.188)无相关性。②肾透明细胞癌细胞系的MKP-1表达水平显著高于正常肾小管上皮细胞系。③成功构建了过表达以及敲低MKP-1质粒,并进行慢病毒包装,成功培育了过表达、敲低MKP-1的A498肾癌稳转细胞系以及敲低MKP-1的Caki-1肾癌稳转细胞系。④在A498和Caki-1的细胞功能实验中,与空载体对照组相比,MTS实验显示过表达MKP-1的细胞增殖能力明显上升,敲低MKP-1的细胞增殖能力显著下降;划痕实验显示过表达MKP-1的迁移细胞数显著增多,敲低MKP-1的迁移细胞数明显较少;transwell实验显示过表达MKP-1的穿膜细胞数显著增多,敲低MKP-1的穿膜细胞数显著减少(P均0.05)。结论：MKP-1在肾透明细胞癌组织中的异常高表达可能与肿瘤的生长、侵袭能力有关,在肾透明细胞癌的恶性进展中发挥重要作用。
【关键词】：MKP-1 肾肿瘤 增殖 侵袭力
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 MKP-1在肾透明细胞癌组织中的表达及与临床病理资料的相关性11-21
• 1. 材料与方法11-18
• 2. 结果18-20
• 3. 小结20-21
• 第二部分 MKP-1过表达质粒和敲除质粒的构建、慢病毒包装以及肾癌稳转细胞株的建立21-29
• 1. 材料与方法21-26
• 2. 结果26-28
• 3. 小结28-29
• 第三部分 改变MKP-1的表达对人肾癌细胞系A498和Caki-1增殖、迁移和侵袭能力的影响29-34
• 1. 材料与方法29-31
• 2. 结果31-33
• 3. 小结33-34
• 讨论及结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述：MKP-1在肿瘤中的研究进展38-46
• 参考文献42-46
• 英文缩略词表46-47
• 攻读学位期间发表论文47-48
• 致谢48

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 巩会杰;牛少曦;李世超;沈东来;顾良友;李新涛;高宇;张瑜;马鑫;姚远新;张旭;;双特异性磷酸酶-1过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭的影响[J];解放军医学院学报;2015年04期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 鲍洋洋;靶向抑制GLUT-1及PI3K/Akt信号通路提高喉癌放射敏感性体外研究[D];浙江大学;2014年

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本文编号：462370