系膜细胞活化模型的建立及其对单核巨噬细胞的生物学效应

发布时间：2017-06-20 20:02

  本文关键词：系膜细胞活化模型的建立及其对单核巨噬细胞的生物学效应，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨人肾脏系膜细胞(Human mesangial cells, HMCs)的活化最佳条件和HMCs活化的细胞表型和分子标志,以及活化后的HMCs对人单核巨噬细胞(Human monocyte macrophages cells, HMMCs)产生的生物学效应。方法：1.人HMCs的活化研究及活化后的细胞表型和分子标志研究：用lOng/ml、 20ng/ml、50ng/ml的重组人血小板源性生长因子(Recombinant Human Platelet Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB)分别刺激HMCs 2h,6h,12h.24h 48h. 72h,实时荧光定量核酸扩增检测系统技术(Real-time Quantitative PCR Detecting System, qPCR)寻找并确定最佳刺激浓度和时间；细胞计数(Cell Counting K-8, CCK-8)检测HMCs活化后的增殖能力；细胞划痕实验(Cell Scratch Test)测定HMCs活化后的趋化及迁徙能力；免疫荧光染色技术(Immunofluorescence Staining)检测活化后的HMCs的Desmin、a-SMA、PDGFR-β、Transgelin Tensin表达情况,并利用qPCR技术检测HMCs处于活化高表达状态下可以持续的时间。2.活化的人肾系膜细胞对人单核巨噬细胞的生物学效应：用qPCR方法检测PDGF-BB刺激后的HMCs是否可以分泌诱导HMMCs活化的细胞因子以及有无分泌HMMCs活化的分子标志；将PDGF-BB诱导的的HMCs与HMMCs置于Transwell系统中进行共培养,选取2h、6h、12h、24h、48h、72h时间节点,研究活化后的HMCs对HMMCs的生物学效应；CCK-8检测共培养后HMMCs的增殖能力,细胞划伤实验检测共培养后HMMCs的趋化和迁徙能力。结果：1.人HMCs的活化以及活化后的细胞表型和分子标志：(1) qPCR技术检测不同浓度刺激下的不同时间点的HMCs活化后的细胞因子IL-1、IL-6、CCL-2、 PDGFR-β、Transgelin、Tensin mRNA表达情况结果显示：当使用浓度为20ng/ml的PDGF-BB刺激HMCs时,效果最为明显,且于刺激48h的时候观察细胞因子分泌情况效果最佳并且最为显著,72h时观察反而有一个回落趋势,说明HMCs活化于48h的时候出现顶峰。(2)不同浓度的PDGF-BB刺激HMCs后细胞的增殖能力：细胞计数和CCK-8均显示：加入PDGF-BB刺激的HMCs相比较于空白对照组,均在20ng/ml浓度的PDGF-BB刺激下增殖最为明显(p0.05)。(3)活化后的HMCs的的迁徙能力变化：分别于六孔板内划伤20ng/ml的PDGF-BB刺激48h后的HMCs和对照组,结果显示实验组的细胞最后剩余的伤痕面积明显少于对照组,面积计算有统计学意义(p0.05)。(4)细胞活化表型的蛋白质学改变：免疫荧光染色显示,活化表型Desmin、a-SMA、PDGFR-β、Transgelin Tensin表达量与对照组相比均有增强,NF-kB的核内转运也明显强于对照组。(5)HMCs处于活化高表达状态下可以持续的时间HMCs于48h的时候处于活化高表达的最高峰,以48h为基点,qPCR检测技术显示这种活化状态一直到在此之后的48h才逐渐趋于没有。2.活化的人肾系膜细胞与人单核巨噬细胞的生物学效应：(1) PDGF-BB刺激HMCs细胞可以分泌促使HMMCs活化的细胞因子TNF和IL-4,而不会分泌HMMCs活化的分子标志CCL-1和CCL-15和CCL-17。(2)活化的HMCs和HMMCs共培养：共培养状态下的HMMCs不分泌CCL-17(抑炎型),而会分泌CCL-15(M1型)和CCL-1(调节型)并在24h的时候达到最高。(3)与活化的HMCs共培养后的HMMCs细胞的增殖能力和迁徙趋化能力都明显高于未共培养的HMMCs (P0.05)。结论：1.PDGF-BB刺激HMCs并可以致其活化的最佳浓度和最佳时间分别是20ng/ml和刺激48h,在此条件下,HMCs的增殖和迁徙能力都达到最高点(p0.05),免疫荧光也表明各种分子标志和细胞表型都在此时表达量最高。此种活化状态在逐渐变弱的情况下仍然可以维持大约48h,充足用于刺激并活化HMMCs。2.活化的HMCs可以分泌诱导HMMCs活化的细胞因子而不会分泌HMMCs活化的细胞表型和分子标志,可以排除后期共培养时的假阳性结果。共培养24h HMMCs的细胞表型表达量最高,活化后的HMCs只会刺激HMMCs产生M1型巨噬细胞(促炎)和调节型巨噬细胞,而不会刺激HMMCs产生M2型巨噬细胞(抑炎)。
【关键词】：人 系膜细胞 单核巨噬细胞 活化 交互作用
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分 系膜细胞活化模型的建立12-40
• 前言12-13
• 材料与方法13-19
• 结果19-32
• 讨论32-35
• 小结35-36
• 参考文献36-40
• 第二部分 活化的人肾系膜细胞对人单核巨噬细胞的生物学效应40-60
• 前言40
• 材料与方法40-46
• 结果46-54
• 讨论54-56
• 小结56-57
• 参考文献57-60
• 文献综述60-75
• 参考文献68-75
• 攻读学位期间发表学术论文75-76
• 致谢76

【共引文献】

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6 张彤;唐兴奎;梁伟雄;蔡育志;李林;何嘉琳;陈豫钦;;网/腹膜乳斑的巨噬细胞表型与结直肠癌分期的关系[J];岭南现代临床外科;2014年01期

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4 原江水;白藜芦醇对大鼠的抗衰老作用研究[D];中国海洋大学;2013年

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本文编号：466694