游离脂肪酸激活大鼠肾小球系膜细胞NLRP3炎症小体信号及作用机制研究

发布时间：2017-06-25 04:10

  本文关键词：游离脂肪酸激活大鼠肾小球系膜细胞NLRP3炎症小体信号及作用机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:糖尿病肾病(DN)是糖尿病的严重微血管并发症,已成为西方国家终末期肾病的主要原因。近年来研究表明固有免疫介导的炎症是糖尿病肾病发生发展的重要环节。固有免疫系统是机体抵抗病原体的第一道防线,它通常参与炎症的启动和扩展,通过模式识别受体激活以识别“自己”和“异己”分子抗原。模式识别受体可通过损伤相关分子模式和病原相关分子模式识别危险信号,启动炎症反应,以应答环境中的感染和组织损伤。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(即NLRP3)炎症小体是固有免疫系统的一员,可被内源性和外源性危险信号激活,继而触发固有免疫,导致胱天蛋白酶Caspase-1激活,促进促炎细胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的成熟和分泌,放大促炎反应。越来越多证据表明NLRP3炎症小体在各种炎症性疾病中起着重要作用,促炎细胞因子在炎症过程中起重要调节作用。血浆游离脂肪酸升高可以导致脂毒性的发生,具有脂毒性的游离脂肪酸可刺激组织释放炎症因子,并与这些炎症因子共同作用,造成机体代谢器官长期处于低度炎症状态。然而游离脂肪酸是否在肾小球系膜细胞激活NLRP3炎症小体并参与肾脏炎症的发生尚不清楚。因此,本研究通过观察NLRP3炎症小体信号通路在棕榈酸以及活性氧(ROS)抑制剂NAC作用下肾小球系膜细胞的表达,旨在探讨高脂介导的NLRP3炎症小体信号通路在肾脏炎症反应中的作用及相关机制,找到以NLRP3炎症小体信号通路为治疗靶点的新思路。方法:(1)细胞培养及分组:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,以棕榈酸(PA)作为刺激因子,活性氧抑制剂NAC作为阻断剂,分别设置以下三组:①正常对照组(NC组):培养基含5.6 mmol/L葡萄糖;②棕榈酸组(HPA组):设定棕榈酸浓度梯度3个组,HPA1组:培养基含0.05 mmol/L棕榈酸;HPA2组:培养基含0.1 mmol/L棕榈酸;HPA3组:培养基含0.15 mmol/L棕榈酸;③高棕榈酸+NAC组(NAC+HPA组):0.15 mmol/L棕榈酸培养基内预先加入10μmol/L NAC阻断活性氧的产生,以观察活性氧在棕榈酸激活NLRP3炎症小体信号中的作用。(2)各组细胞分别培养6h、9h、12h后,使用蛋白免疫印迹法和RT-PCR分别检测各组NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA的表达。(3)统计学分析:数据均采用SPSS 17.0统计软件进行分析,以均数±标准差(xˉ±s)表示,各组间比较使用单因素方差分析,两两比较使用q检验,组内比较使用独立样本均数t检验,检验标准a=0.05,P0.05表示差异有统计学意义。结果:(1)棕榈酸刺激系膜细胞NLRP3炎症小体信号分子的表达变化:与正常对照组相比,不同作用浓度和时间的棕榈酸组均可上调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达(P0.05),且呈一定的浓度和时间依赖性,其中NLRP3以0.15mmol/L棕榈酸作用9h表达最强;Caspase-1、IL-1β以0.15mmol/L棕榈酸作用12h表达最强。(2)NAC干预阻断活性氧后,棕榈酸作用的肾小球系膜细胞NLRP3炎症小体信号分子的表达变化:与单纯高棕榈酸组相比,预先加入NAC阻断氧化应激可阻止棕榈酸诱导的NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达增强(P0.05)。结论:棕榈酸可能通过氧化应激机制诱导肾小球系膜细胞NLRP3炎症小体信号的活化,这可能是游离脂肪酸介导肾脏炎症反应的机制之一。
【关键词】：糖尿病肾病 NLRP3炎症小体 棕榈酸 氧化应激 炎症
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-28
• 结果28-38
• 讨论38-45
• 结论45-46
• 参考文献46-52
• 英汉缩略词对照表52-54
• 致谢54-55
• 炎症小体与肾脏疾病研究进展（综述）55-65
• 参考文献61-65

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本文编号：480720