PLCε通过STAT3磷酸化调控膀胱癌细胞炎症因子释放

发布时间：2017-06-28 01:04

  本文关键词：PLCε通过STAT3磷酸化调控膀胱癌细胞炎症因子释放，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分PLCε和p-STAT3蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及相关性目的研究磷脂酶Cε(PLCs)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达相关性及与TCCB病理分级分期之间的关系。方法采用免疫组织化学法检测48例膀胱移行细胞癌组织及21例癌旁组织中PLCs和p-STAT3蛋白表达,显微镜下观察并拍照,IPP6.0软件分析平均光密度值,统计学分析PLCε和p-STAT3的表达与临床各病理参数的关系及两者的相关性。结果PLCε与p-STAT3在膀胱移行细胞癌组织表达水平均明显高于相应癌旁组织(P0.01)。PLCε蛋白表达水平与膀胱移行细胞癌病理分期有关(P0.05)但与病理分级无关(P0.05)；p-STAT3蛋白表达水平与病理分期及病理分级均无关(P0.05)。Spearman相关分析结果显示PLCε与p-STAT3的蛋白表达呈正相关(r=0.817,P0.01)。结论PLCε蛋白在膀胱移行细胞癌组织中高表达,且与p-STAT3的高表达密切相关,为进一步探索PLCε及p-STAT3在膀胱癌发生发展中的作用奠定了基础。第二部分PLCε对膀胱癌细胞炎症相关因子表达的影响目的探讨感染Ad-shPLCε腺病毒后对膀胱癌T24, BIU-87细胞炎症相关因子表达的影响。方法膀胱癌T24, BIU-87细胞分别感染阳性腺病毒(Ad-shPLCε)和空载腺病毒(Ad-HK), qRT-PCR和western blot检测PLCε表达,qRT-PCR及ELISA检测interleukin-6 (IL-6),tumor necrosis factor-a (TNF-a)和interleukin-1β (IL-1β)表达,western blot检测TLR4, Myd88表达。结果T24, BIU-87细胞分别感染阳性腺病毒(Ad-shPLCε)后,PLCε表达明显下调,表明PLCε特异腺病毒干扰效果好。qRT-PCR及ELISA结果显示感染Ad-shPLCε组IL-6,TNFa,IL-1β mRNA及蛋白表达下调,与Ad-HK组比较差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示感染Ad-shPLCε组TLR4, Myd88蛋白表达水平下调,与Ad-HK组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论应用腺病毒RNA干扰技术干扰PLCε基因后,抑制细胞因子IL-6,TNF-a和IL-1 p的表达及TLR4, Myd88的表达。第三部分沉默PLCε基因通过下调STAT3磷酸化水平抑制细胞因子的释放目的进一步探讨PLCs调控膀胱癌细胞中细胞因子释放的分子机制。方法膀胱癌细胞株T24, BIU-87分别用LPS, Ad-shPLCε, LPS联合Ad-shPLCε处理,ELISA检测IL-6,TNF-a和IL-1p分泌；Western blot检测Ad-shPLCε处理后p-STAT3, STAT3及p-ERK, ERK的表达；不同浓度的p-STAT3抑制剂S3I-201处理T24, BIU-87细胞,western blot检测p-STAT3的表达；S3I-201联合Ad-shPLCε处理T24, BIU-87细胞,western blot检测p-STAT3的表达；T24, BIU-87细胞用LPS, Ad-shPLCε, LPS联合Ad-shPLCε处理,western blot检测p-STAT3的表达。结果ELISA结果显示：IL-6,TNF-a, IL-1β表达在LPS联合Ad-shPLCε处理组低于LPS单独处理组。Ad-shPLCε处理后p-STAT3表达明显下调,而STAT3, p-ERK, ERK表达无明显变化。western blot结果显示：S31-201能明显抑制T24, BIU-87细胞中p-STAT3的表达并且呈浓度依赖性,S3I-201与Ad-shPLCε协同抑制T24, BIU-87细胞中p-STAT3的表达。p-STAT3的表达水平在LPS联合Ad-shPLCs处理组低于LPS单独处理组。结论干扰PLCε基因的表达通过下调STAT3的磷酸化抑制膀胱癌细胞促炎细胞因子的释放。
【关键词】：PLCε p-STAT3 膀胱移行细胞癌 PLCε IL-6 TNF-a IL-1β TLR4 Myd88 PLCε LPS p-STAT3 S3I-201
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14;R730.43
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 附：技术路线16-17
• 第一部分 PLCε和p-STAT3蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其相关性17-23
• 1 材料与方法17-19
• 2 结果19-21
• 3 讨论21-23
• 第二部分 PLCε对膀胱癌细胞炎症相关因子表达的影响23-34
• 1 材料与方法23-29
• 2 结果29-32
• 3 讨论32-34
• 第三部分 沉默PLCε基因通过下调STAT3磷酸化水平抑制细胞因子的释放34-42
• 1 材料与方法34-35
• 2 结果35-40
• 3 讨论40-42
• 全文总结42-43
• 参考文献43-47
• 文献综述47-56
• 参考文献51-56
• 致谢56-57
• 玫读硕士学位期间的研究成果及发表的学术论文目录57

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本文编号：491892