抑制内源性硫化氢生成加重尿源性脓毒症肾损伤的肾细胞凋亡

发布时间：2017-07-01 18:20

  本文关键词：抑制内源性硫化氢生成加重尿源性脓毒症肾损伤的肾细胞凋亡，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的复制兔尿源性脓毒血症模型,应用胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)抑制剂DL-炔丙基甘氨酸(DL-Propargylglycine,PAG)抑制内源性硫化氢的生成,观察兔肾组织Bcl-2、Bax、CSE及NF-κB的表达及肾脏组织细胞凋亡情况,明确内源性硫化氢对尿源性脓毒血症肾脏细胞凋亡的影响及其机制。方法1、将兔左侧输尿管远端结扎,在其近端注入大肠杆菌(ATCC25922),制造尿源性脓毒血症动物模型;2、将32只健康雄性兔(1.8-2.2Kg/只)随机分为4组:对照组(A组);假手术组(B组);尿源性脓毒血症组(C组);PAG组(D组),每组8只;3、将各组分为术前,术后12h、24h、36h、48h,5个时间点观测肛温(RT)、呼吸(RR)和心率(HR)等指标;4、5个时间点采血,行外周血白细胞计数分析、肾功能(Cr、BUN)测定;5、术后48小时测血浆硫化氢浓度;6、术后48小时各组兔处死后取肾组织HE染色,并观察其结构形态的变化;PCR法检测各组兔Bcl-2、Bax及CSE的表达;Tunel法检测其肾组织细胞凋亡;免疫组化法检测兔肾组织中NF-κB的表达。结果1.各组兔术前、术后各体温、呼吸及心率比较:A组与B组体温、呼吸及心率情况相比,无统计学意义(P0.05);C组高于A、B两组(P0.05),D组高于C组(P0.05)。2.抽血结果比较:各组兔术前白细胞、中性粒细胞、血肌酐(CR)、血尿素氮(BUN),无明显差异,无统计学意义。术后各时间点的血白细胞、中性粒细胞;CR、BUN结果:A组与B组相比,无明显差异(P0.05);C组各指标值高于A、B两组(P0.05);D组与C组相比各指标均呈上升趋势,有统计学意义(P0.05)。3.术后48H血浆H2S浓度检测:A、B组血浆H2S的含量相比无明显差异,无统计学意义(P0.05)。C、D两组血浆H2S的含量与A、B组相比明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。其中D组血浆H2S的含量较C组明显降低,差异显著有统计学意义(P0.05)。4.病理形态改变:HE染色:A、B两组兔肾组织的形态结构大致相同,呈正常形态;C组肾组织充血、脓肿,大量炎症细胞浸润,肾小球与肾小囊、肾小管出现形态改变;D组比C组肾脏病理损害更严重。5.RT-PCR法检测:肾脏组织中Bax、Bcl-2及CSE的表达情况:A组与B组Bax、Bcl-2、CSE的表达相差不大;Bax的表达于D组最强,相反Bcl-2及CSE于D组表达最微弱;D组与C组相比Bax表达明显增强,而Bcl-2及CSE表达明显减弱。6.TUNEL法检测肾组织的细胞凋亡:A、B两组可见少量肾小管的上皮细胞凋亡。C组可见成片的细胞凋亡和凋亡小体形成,与A、B两组凋亡指数相比差异明显(P0.05)。D组较C组肾组织细胞凋亡情况严重,呈广泛片状(P0.05)。7.免疫组化法检测各组兔NF-ΚB蛋白的表达情况:A、B组NF-ΚB蛋白检测相比无明显差异,无统计学意义(P0.05);C组术后48h中NF-ΚB的蛋白与A、B组比较明显增强(P0.05),差异有统计学意义;D组术后48h NF-ΚB的蛋白与C组相比亦有增强(P0.05)有统计学意义。结论1、成功复制兔尿源性脓毒血症模型;2、应用PAG可抑制兔尿源性脓毒血症内源性H2S的生成,加重了尿源性脓毒血症肾损伤;其机制可能是通过上调NF-κB的表达,同时上调凋亡相关BAX的表达,以及下调凋亡相关Bcl-2的表达有关。
【关键词】：内源性硫化氢 PAG 尿源性脓毒血症 细胞凋亡
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692;R459.7
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 第1章 绪论13-15
• 第2章 实验材料15-17
• 2.1 实验动物15
• 2.2 主要试剂与配制15-16
• 2.3 主要仪器、设备16-17
• 第3章 实验方法17-23
• 3.1 大肠杆菌培养及菌液制备17
• 3.2 动物实验分组以及手术操作17-18
• 3.3 观察和检测指标及检测方法18-22
• 3.4 数据分析22-23
• 第4章 结果23-37
• 4.1 四组兔的的情况比较23
• 4.2 四组兔肛温（RT）、呼吸频率（RR）及心率（HR）的改变23-26
• 4.3 四组兔肌酐（Cr）、尿素氮（BUN） 改变26-28
• 4.4 四组兔的白细胞（WBC）、中性粒细胞（N）的改变28-30
• 4.5 术后 48 H测血浆H2S含量30-31
• 4.6 肾脏HE染色后改变31-32
• 4.7 Tunel法检测，肾细胞凋亡情况32-33
• 4.8 RT-PCR 法检测四组兔 Bax、Bcl-2 及 CSE 的表达水平33-35
• 4.9 免疫组化法检测四组新西兰兔肾脏组织 NF-ΚB 蛋白的表达35-37
• 第5章 讨论37-40
• 第6章 结论40-41
• 参考文献41-45
• 文缩写注解45-46
• 综述46-51
• 参考文献49-51
• 硕士期间发表的文章51-52
• 致谢52

【共引文献】

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本文编号：506986