沉默NOL3基因对前列腺癌细胞浸润性发展及凋亡分子机制的研究

发布时间：2017-07-02 21:02

  本文关键词：沉默NOL3基因对前列腺癌细胞浸润性发展及凋亡分子机制的研究

  更多相关文章： 前列腺癌 基因芯片 NOL3 慢病毒 细胞凋亡

【摘要】：目的:使用Rt2 Profiler PCR Array基因芯片技术检测PCA与BPH组织中基因表达的差异性,使用sh RNA干扰技术靶向沉默NOL3基因在前列腺癌细胞株中的表达情况,观察癌细胞株生物学行为改变,并探讨NOL3基因在前列腺癌细胞凋亡过程中的具体分子机制。方法:1.收集前列腺肿瘤及良性前列腺增生的组织,使用Rt2 Profiler PC R Array基因芯片检测技术检测PCA与BPH组织中基因表达的差异性,并使用RT-PCR技术对其中差异性表达较大的存在交互关系网络的基因进行进一步验证。2.构建沉默NOL3基因的慢病毒,PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3-341转染前列腺癌细胞株(PC3及DU145),为转染组;转染对酯体为阴性对照组;未处理组为空白组。通过荧光显微镜观察前列腺癌细胞株慢病毒的转染效率,q RT-PCR检测NOL3基因的表达效果,MTT法检测转染后24h、48h、72h后,PC3及DU145细胞增殖情况;Transwell小室法检测转染肿瘤细胞侵袭力变化情况;Western blot法检测NOL3基因蛋白的表达情况,流式细胞仪检测转染后PC3及DU145细胞凋亡的影响情况,Caspase 8/9活性检测试剂盒检测沉默NOL3基因后细胞中Caspase 8/9酶活性改变。结果:1.使用Rt2 Profiler PC R Array基因芯片检测技术检测PCa与BPH组织中肿瘤相关基因,我们发现AASDHPPT、CASP2、CASP8、CFLAR、CSNK2A1、EHD1、EHD4、NIF3L1、NOL3、SIRPA、TFPT以及VASP共计12个基因存在表达差异性。2.PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3转染至PC3和DU145细胞的效率分别为90%和80%。转染后,PC3和DU145细胞中NOL3基因的表达水平明显低于阴性对照组和空白组(P0.05);转染组PC3和DU145细胞增殖的抑制率明显高于其他两组(P0.05),且呈时间依赖性;转染组PC3及DU145细胞侵袭力明显低于阴性对照组和空白组(P0.05);转染组前列腺癌细胞株中表达NOL3蛋白的水平显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);caspase-8及caspase-9活化水平明显高于阴性组和空白组(P0.05);转染组PC3和DU145细胞的凋亡率明显高于阴性对照组和空白组(P0.05)。结论:1.Rt2 Profiler PCR Array基因芯片检测技术能够有效地筛选出与前列腺癌发生、发展及转移相关的关键基因;2.前列腺癌的发生、发展及转移过程是由多基因、多因素共同调控相互作用完成的,并非由单一因素所致;3.NOL3基因能够抑制肿瘤细胞的凋亡,靶向沉默NOL3基因并抑制其表达,可显著降低前列腺肿瘤细胞的增殖、侵袭力以及抗凋亡能力;
【关键词】：前列腺癌 基因芯片 NOL3 慢病毒 细胞凋亡
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料和方法13-38
• 2.1 实验材料13
• 2.1.1 组织标本13
• 2.1.2 细胞来源13
• 2.2 主要仪器和试剂13-16
• 2.2.1 主要仪器13-14
• 2.2.2 主要试剂14-15
• 2.2.3 试剂配置15-16
• 2.3 实验方法16-26
• 2.3.1 前列腺癌组织中基因表达差异性检测16
• 2.3.2 PCa/BPH的鉴定及分离16-18
• 2.3.3 Rt2 Profiler PCR Array检测前列腺癌信号通路基因的差异性表达18-21
• 2.3.4 q RT-PCR检测PCa与BPH组织中关联基因的表达差异21-26
• 2.4 靶向沉默NOL3基因对前列腺肿瘤细胞的影响26-37
• 2.4.1 细胞培养26-28
• 2.4.2 细胞转染28-30
• 2.4.3 转染 48h后，q RT-PCR检测前列腺癌细胞NOL3的m RNA表达30-33
• 2.4.4 转染 48h后，western blot检测NOL3的蛋白表达33-35
• 2.4.5 MTT检测细胞生长增殖情况35-36
• 2.4.6 Transwell检测细胞侵袭力的改变36
• 2.4.7 caspase-8/9 荧光检测试剂盒检测caspsase-8/9 蛋白的表达情况36-37
• 2.4.8 流式细胞仪检测前列腺肿瘤细胞凋亡情况37
• 2.5 统计方法37-38
• 第3章 结果38-50
• 3.1 Rt2 Profiler PCR Array检测前列腺癌信号通路基因差异性表达38-45
• 3.1.1 荧光定量PCR扩增结果38-41
• 3.1.2 PCR Array数据分析41-44
• 3.1.3 GNCPro分析软件模拟12个兴趣基因交互关系44-45
• 3.2 9个关联基因在前列腺癌及良性前列腺增生组织中的表达量45-46
• 3.3 靶向沉默NOL3基因对PCa细胞株的影响46-50
• 3.3.1 慢病毒转染效率46
• 3.3.2 PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3转染后抑制前列腺癌PC3和DU145细胞中NOL3的表达46-47
• 3.3.3 PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3转染后抑制前列腺癌PC3和DU145细胞中NOL3蛋白的表达47-48
• 3.3.4 下调NOL3的表达可抑制前列腺癌PC3和DU145细胞的增殖48
• 3.3.5 抑制NOL3的表达可降低前列腺癌PC3和DU145细胞的侵袭力48
• 3.3.6 抑制NOL3的表达可提高Caspase-8 及Caspase-9 的活化程度 ..3948-49
• 3.3.7 抑制NOL3的表达可促进前列腺癌PC3和DU145细胞发生凋亡49-50
• 第4章 讨论50-53
• 第5章 结论与展望53-54
• 致谢54-55
• 参考文献55-58
• 附图58-62
• 综述 Caspase调控细胞凋亡的机制研究62-68
• 参考文献66-68

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王东生,袁肇凯,郭志华;细胞凋亡与中医药[J];中国中医药信息杂志;2000年12期

2 万晓艳,于苏国,郭玉芹,何庆;细胞凋亡与自身免疫性甲状腺疾病的研究进展[J];中国地方病防治杂志;2002年06期

3 祝伟民,林建棣,马晓东,段小平;运动与细胞凋亡[J];中国临床康复;2004年27期

4 王会玲,景文莉,张小红,高维娟;细胞凋亡与心肌缺血-再灌注损伤[J];承德医学院学报;2005年04期

5 梁薇;细胞凋亡的中药调节机制[J];四川中医;2005年11期

6 张松彪;细胞凋亡与细胞养生[J];中国科技产业;2005年01期

7 杨竹林,伍汉文;细胞凋亡调控因素有关基因的研究[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1997年02期

8 刘恩梅,杨锡强;细胞凋亡及其影响因素[J];重庆医学;1998年01期

9 ;美开发调控细胞凋亡药物[J];中国肿瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明阳;细胞凋亡在致畸中的作用[J];卫生毒理学杂志;2000年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈颖丽;李前忠;;不同亚细胞位置的细胞凋亡蛋白质的结构特性分析[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

2 孙英丽;赵允;朱山;翟中和;;植物细胞凋亡及其机理的研究[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年

3 刘二龙;袁慧;;锌与细胞凋亡[A];2003全国家畜内科学学术研讨会论文专辑[C];2003年

4 邱洁;高海青;;锌在细胞凋亡中的作用研究进展[A];山东省微量元素科学研究会第三届学术研讨会论文汇编[C];2006年

5 俞雅萍;;细胞凋亡的机制及途径和影响因素[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

6 于青;袁伟杰;姚建;;晚期糖基化终末产物引起足细胞凋亡的机制[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨锋;;调控细胞凋亡的线粒体因素[A];肿瘤病因学研究与中西医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集[C];2009年

8 吴经纬;汤长发;;运动中细胞凋亡的线粒体变化特征[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年

9 蒲小平;李长龄;屠鹏飞;宋志宏;;中药肉丛蓉成分抗神经细胞凋亡的实验研究[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年

10 江键;宋诚荣;崔黎丽;方影;王小平;;静电场对细胞凋亡作用的初步探讨[A];中国物理学会第九届静电学术年会论文集[C];2000年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 商东;“细胞凋亡”与临床医学[N];中国医药报;2001年

2 张志军;细胞凋亡与中医药[N];中国医药报;2002年

3 ;“细胞凋亡疗法”正逐步成为治疗癌症的新途径[N];中国高新技术产业导报;2002年

4 记者张建松;治疗癌症新途径：细胞凋亡疗法[N];科技日报;2002年

5 李明辉;“细胞凋亡”治癌症[N];医药导报;2002年

6 洪敏;细胞凋亡研究引人关注[N];中国医药报;2008年

7 陶春祥;细胞凋亡对心脏疾病的影响[N];中国医药报;2003年

8 本报实习记者 梁媛媛;薛定：发现癌症“开关”[N];北京科技报;2010年

9 高书明;诱导癌细胞凋亡[N];中国医药报;2004年

10 勇汇;中药诱导癌细胞凋亡研究进展[N];中国医药报;2002年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 杨利;系列多氮类化合物的抗肿瘤活性研究[D];武汉大学;2012年

2 张浩;从分子、细胞和动物水平研究铅诱发氧化损伤及细胞凋亡的效应与机理[D];山东大学;2015年

3 何欣怡;家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）抑制家蚕BmN细胞凋亡的功能研究[D];浙江大学;2015年

4 冯全服;从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制[D];南京中医药大学;2015年

5 张晓倩;高糖诱导Bim蛋白高表达而促肾近曲小管上皮细胞凋亡的机制探讨[D];山东大学;2015年

6 孙健玮;PTEN基因负调控Raf1磷酸化的作用及其对PC3细胞凋亡的影响[D];昆明医科大学;2014年

7 徐林艳;肿瘤细胞凋亡过程中TNFRSF10B和CFLAR调控机制研究[D];山东大学;2015年

8 樊庆端;生物调控网络的建模与动力学行为研究[D];上海大学;2015年

9 王德选;WNK_3对钠氯协调转运子的调节及在胚肾细胞凋亡中的保护作用[D];南方医科大学;2015年

10 叶嘉;Nogo-B在急性肺损伤肺泡上皮细胞凋亡中的作用[D];第二军医大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 安璐;3-氯-1,2-丙二醇细胞毒性及其诱导HEK293细胞凋亡途径探究[D];江南大学;2015年

2 杨翔;Procaspase-8的异常表达抑制TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡[D];昆明理工大学;2015年

3 张昌明;I3C通过调控p53泛素化对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响[D];延边大学;2015年

4 彭涵;共轭亚油酸对仔猪脂肪细胞凋亡的影响[D];西南大学;2015年

5 李立辉;ΔFosB通过MMP-9调控山羊乳腺上皮细胞凋亡的分子机制[D];西北农林科技大学;2015年

6 杨鑫铖;Hedgehog信号通路在大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用[D];河北医科大学;2015年

7 贾琼琼;MicroRNA-214对H_2O_2损伤L6骨骼肌成肌细胞增殖和凋亡的影响[D];河北医科大学;2015年

8 王海莹;不同浓度17β-雌二醇对IL-1β诱导的大鼠纤维环细胞凋亡的影响[D];河北医科大学;2015年

9 王怡;地西他滨对Jurkat细胞增殖、凋亡及TAL1基因表达的影响[D];郑州大学;2015年

10 张文明;抗肿瘤活性物质的筛选及其抗肿瘤机制的研究[D];西南交通大学;2015年

  本文关键词：沉默NOL3基因对前列腺癌细胞浸润性发展及凋亡分子机制的研究

  更多相关文章： 前列腺癌 基因芯片 NOL3 慢病毒 细胞凋亡

，

本文编号：511209