补体B因子在常染色体显性多囊肾病发病中的作用及机制研究

发布时间：2017-07-05 12:21

  本文关键词：补体B因子在常染色体显性多囊肾病发病中的作用及机制研究

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【摘要】：研究目的:研究在常染色体显性多囊肾病中,补体B因子的表达及可能的调控机制,并在体外条件下探讨补体B因子在巨噬细胞分化中的作用。方法:1.收集ADPKD患者肾脏组织以及Han:SPRD大鼠肾脏组织,蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法检测PC1-CTT、CFB的表达以及JAK2/STAT1通路蛋白的活化情况。2.在UCL93细胞中转染STAT1质粒或给予STAT1特异性抑制剂Fludarabine后,蛋白免疫印迹法检测p-STAT1的活化情况以及CFB的表达情况。3.在UCL93细胞中共转染空载体和CFB启动子质粒以及海肾荧光素酶质粒作为对照组,共转染STAT1质粒和CFB启动子质粒以及海肾荧光素酶质粒作为实验组,双荧光素酶报告基因体系检测STAT1对CFB启动子的作用。4.在293T细胞中采用染色质免疫共沉淀的方法检测转录因子STAT1是否与CFB启动序列直接结合。5.在UCL93细胞中转染PC1-CTT质粒后给予STAT1抑制剂,蛋白免疫印迹法检测p-STAT1的活化情况以及CFB的表达情况。6.在UCL93细胞中共转染PC1-CTT质粒+CFB-Pr+海肾荧光素酶质粒,共转染PC1-CTT质粒+STAT1结合位点突变的CFB启动子质粒+海肾荧光素酶质粒,双荧光素酶报告基因体系检测CFB启动子活性。7.在UCL93细胞中共转染PC1-CTT质粒+空载体+CFB-Pr+Renilla,共转染PC1-CTT质粒+DN-STAT1+CFB-Pr+Renilla,双荧光素酶报告基因体系检测PC1-CTT对CFB启动子活性的作用。8.在UCL93细胞中转染PC1-CTT质粒后给予NF-κB抑制剂,蛋白免疫印迹检测CFB和NF-κB通路蛋白的表达,双荧光素酶报告基因体系检测CFB启动子活性。9.给予RAW264.7细胞人纯化的补体B因子刺激和PC1-CTT-CM刺激,免疫印迹和RT-PCR法检测RAW264.7细胞的分化情况。10.PC1-CTT-CM中阻断补体B因子后培养RAW264.7细胞,免疫印迹法检测RAW264.7细胞的分化情况。11.UCL93细胞给予STAT1抑制剂处理后,收集条件培养液培养RAW264.7细胞,免疫印迹法检测RAW264.7细胞的分化情况。12.在UCL93细胞中转染PC1-CTT质粒后给予STAT1抑制剂,收集条件培养液培养RAW264.7细胞,免疫印迹法检测RAW264.7细胞的分化情况。结果:1.与对照组相比,ADPKD患者和Cy/+Han:SPRD大鼠肾脏组织中CFB和PC1-CTT表达明显增高,JAK2/STAT1通路明显活化。2.PC1-CTT可通过JAK2-STAT1通路调控CFB的转录和表达。3.PC1-CTT-CM刺激RAW264.7细胞向M2型分化,该过程需STAT1和CFB参与。结论:常染色体显性多囊肾病中,PC1-CTT通过JAK2-STAT1通路上调CFB表达;PCT-CTT-CM诱导巨噬细胞向M2型分化,该过程需STAT1和CFB参与。CFB可能成为治疗和延缓ADPKD进展的一个新靶点。
【关键词】：ADPKD STAT1 CFB 巨噬细胞
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.1
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 缩略词表11-13
• 前言13-15
• 第一部分 补体B因子在常染色体显性多囊肾病中的调控机制15-49
• 前言15-17
• 实验设计17-21
• 材料与方法21-33
• 结果33-48
• 讨论48-49
• 第二部分 PC1-CTT通过JAK2-STAT1-CFB通路对巨噬细胞分化的作用研究49-65
• 前言49-51
• 实验设计51-53
• 材料与方法53-57
• 结果57-63
• 讨论63-65
• 全文总结65-66
• 参考文献66-70
• 综述70-78
• 参考文献73-78
• 在读期间完成和发表的文章78-79
• 致谢79

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本文编号：521968