云南白族人群特发性低枸橼酸尿症与VDR基因SNP的关联研究及VDR和NaDC1在HK-2细胞中的表达

发布时间：2017-07-13 19:20

  本文关键词：云南白族人群特发性低枸橼酸尿症与VDR基因SNP的关联研究及VDR和NaDC1在HK-2细胞中的表达

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【摘要】：[目的]探讨云南白族人群特发性低枸橼酸尿症与维生素D受体(vitamin D receptor, VDR)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism SNP)位点rs7975232、rs2228570、rs731236及rs1544410的关系及维生素D受体(vitamin D receptor, VDR)和二羧酸转运蛋白1(sodium-dicarboxylate cotransporter protein 1, NaDCl)在人肾近曲小管上皮细胞(human kidney-2 cell, HK-2细胞)中的表达。[方法]在2013年10月至2015年12月期间筛选云南白族泌尿系结石患者500例及云南白族正常健康体检者200例留取空腹静脉血及尿液标本,依据尿枸橼酸含量筛选出云南白族200例特发性低枸橼酸尿症患者和120例尿枸橼酸水平正常者为对照组,通过桑格测序技术检测VDR基因SNP位点rs7975232、 rs2228570、rs731236及rs1544410,并分析其与云南白族特发性低枸橼酸尿症之间的相关性。另外按照HK-2细胞培养条件培养细胞,采用流式细胞学检测所培养的HK-2细胞的细胞凋亡情况,免疫细胞化学SP法检测VDR和NaDCl在HK-2细胞中的表达情况。[结果]200例云南白族特发性低枸橼酸尿症患者的尿枸橼酸含量平均值为(239.58±38.66)mg/24h与120例云南白族尿枸橼酸值正常者的尿枸橼酸含量平均值为(593.65±130.33)mg/24h的差异有统计学意义(P0.05)。在VDR基因SNP位点的基因型哈迪温伯格平衡检测中,四个位点的基因型实际频数与预计频数差异有统计学意义(均P0.05)。云南白族特发性低枸橼酸尿症患者组与对照组之间,VDR基因SNP位点rs7975232及rs2228570各基因型频率差异有统计学意义(P0.05),且rs7975232的基因型AA和rs2228570的基因型TT较对照组多见。在两组受检者的24h尿枸橼酸含量中,rs7975232的基因型从和rs2228570的基因型TT者分别为(365.71±195.23)、(363.92±185.43)mg/24h,明显低于rs7975232的基因型CC、CA和rs2228570的基因型CC、CT者[(507.67±197.42)、(485.55±180.15)、(506.47±198.02)、(485.95±190.95)mg/24h,P0.05],差异有统计学意义(均P0.05)。细胞培养：观察并拍照记录细胞生长状态；流式细胞学：1号～4号流式管HK-2细胞的凋亡率分别为6.87%,6.80%,8.31%,4.274%；免疫细胞化学：NaDCl在HK-2细胞中表达,胞膜染色。NaDCl的阴性对照,胞膜未染色。NaDCl的阳性对照,在人胚肾293细胞(human embryonic kidney 293 cells, HEK293 cells)胞膜表达,胞膜染色。VDR在HK-2细胞中表达,核膜染色。VDR的阴性对照,核膜未染色。VDR的阳性对照,在人肺癌细胞系A549核膜表达,核膜染色。[结论]云南白族特发性低枸橼酸尿症与VDR基因SNP位点rs7975232及rs2228570间存在相关性,VDR基因位点rs7975232的基因型AA和rs2228570的基因型TT有望成为云南白族特发性低枸橼酸尿症的遗传标志基因。所培养的HK-2细胞的细胞凋亡率比较低,说明细胞状态较好。VDR和NaDCl分别在HK-2细胞的核膜和胞膜表达。VDR和NaDCl都与低枸橼酸尿症的发生发展有关,推测VDR可能参与调控NaDCl活性或表达,本实验为下一步干扰VDR表达后检测NaDCl表达情况及低枸橼酸尿症的病因学和分子生物学研究奠定了基础。
【关键词】：维生素D受体 单核苷酸多态性 特发性低枸橼酸尿症 二羧酸转运蛋白1 人肾近曲小管上皮细胞
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R691.4
【目录】：

• 缩略词表(以字母顺序排列)5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分11-32
• 前言11-13
• 材料与方法13-19
• 结果19-26
• 讨论26-28
• 结论28-29
• 参考文献29-32
• 第二部分32-40
• 前言32
• 材料与方法32-34
• 结果34-36
• 讨论36-38
• 结论38
• 参考文献38-40
• 综述40-48
• 参考文献45-48
• 攻读学位期间获得的学术成果48-49
• 致谢49-50

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1 李康健;云南白族人群特发性低枸橼酸尿症与VDR基因SNP的关联研究及VDR和NaDC1在HK-2细胞中的表达[D];昆明医科大学;2016年

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本文编号：538124