微小RNA-3691-3p在前列腺癌中低表达及意义初步分析

发布时间：2017-07-18 01:16

  本文关键词：微小RNA-3691-3p在前列腺癌中低表达及意义初步分析

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【摘要】：目的:研究证实,转化生长因子-β1(TGF-β1)可促进前列腺癌(PCa)的生长和转移,因此我们推测TGF-β1相关microRNA(miRNA)即TGF-β1抑制的miRNA可能具有抑制肿瘤的作用。这里基于微阵列分析证实miR-3691-3p在PCa细胞系、肿瘤组织减少,与病人的预后差显著相关。进一步预测miR-3691-3p的靶基因,研究其在PCa组织中的表达及临床意义,为深入研究miRNA在PCa中的作用机制提供线索。方法:(1)利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人类PCa组织标本和细胞株中TGF-β1相关miRNAs的表达水平;在高表达和低表达miR-3691-3p组织标本中对其进行Kaplan-Meier生存分析,及临床病理特征进行分析。(2)运用生物信息学技术预测miR-3691-3p的靶基因;将miR-3691-3p Mimics(M)转染PCa细胞株(PC-3、DU-145),提取蛋白,通过Western blot技术检测miR-3691-3p靶蛋白表达水平;采用免疫组织化学染色验证靶基因在人类前列腺癌组织和正常前列腺组织中的表达水平,并分析其临床意义。结果:(1)利用qRT-PCR检测TGF-β1抑制的相关miRNAs表达时,miR-3691-3p在PC-3细胞系中表达下降2倍,在DU145细胞系中表达降低了3倍。MiR-3691-3p在前列腺癌组织中的表达较正常前列腺组织下降近20倍,它是TGF-β1相关miRNAs中表达量最低的。(2)MiR-3691-3p低表达在临床病例中与以下临床病理特征相关,病理分期(P=0.0251);淋巴结转移(P=0.003);术前前列腺特异性抗原(PSA)(P=0.0019)和阳性脉管浸润(P=0.0017)。此外miR-3691-3p低表达在前列腺癌根治术后患者中有更短的生化复发(BCR)生存率,相比于miR-3691-3p高表达(p0.05)。(3)运用生物信息学技术预测miR-3691-3p的靶基因为CDK17、E2F3和PRDM1。Western blot检测过表达miR-3691-3p的细胞株中,E2F3的表达量明显降低。免疫组织化学法,检测所验证靶基因在前列腺癌组织和正常前列腺组织中的表达水平,在癌组织中E2F3和PRDM1均表现出阳性。结论:(1)相对于正常前列腺组织,前列腺癌中miRNA具有差异表达谱,miR-3691-3p低表达与前列腺癌密切相关;(2)E2F3是miR-3691-3p调控的下游靶基因。
【关键词】：前列腺癌 miR-3691-3P TGF-β1 临床病理特征
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 前言10-12
• 参考文献10-12
• 第一部分 TGF-β1 相关miRNA的筛选及其低表达与临床特征的相关性12-27
• 引言12-13
• 材料与方法13-22
• 1.材料13-15
• 1.1 细胞、引物、mimics来源和组织标本13
• 1.2 主要试剂13
• 1.3 主要仪器设备13-14
• 1.4 常用缓冲液14-15
• 2.方法15-18
• 2.1 PCa细胞株中差异性miRNA的检测15-17
• 2.2 组织标本中差异性miRNA的检测17-18
• 2.3 低表达的miR36913p与临床关系的检测18
• 2.4 数据统计18
• 3.结果18-22
• 3.1 外源性TGF-β1 对TGF-β1 相关差异性miRNAs在PCa细胞株中表达的影响18-19
• 3.2 miR36913p在PCa组织中表达下调19-20
• 3.3 miR36913p的表达量与临床特征的相关性20-21
• 3.4 低表达的miR36913p与PCa预后生存率相关性分析21-22
• 讨论22-23
• 参考文献23-27
• 第二部分 miR36913p靶基因的预测及验证27-39
• 引言27-28
• 材料与方法28-36
• 1 材料28-29
• 1.1 病人组织、细胞、mimics和生物信息系统28
• 1.2 主要试剂28
• 1.3 主要仪器设备28-29
• 2.方法29-32
• 2.1 生物信息学筛选miR36913p靶基因29
• 2.2 Western blot法检测PCa细胞株中靶基因的表达29-31
• 2.3 免疫组织化学法检测PCa组织中靶基因的表达31-32
• 2.4 统计学方法32
• 3.结果32-36
• 3.1 生物信息学筛选出CDK17、PRDM1、E2F3靶基因32-33
• 3.2 Western blot法检测出PCa中E2F3低表达、PRMD差异不明显33-34
• 3.3 免疫组织化学法检测出PCa组织E2F3、PRDM阳性表达34-36
• 讨论36-37
• 参考文献37-39
• 综述 TGF-β1相关microRNA在前列腺癌中的调控作用39-48
• 参考文献43-48
• 缩略词表48-49
• 研究生期间发表的论文49-50
• 致谢50-51

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本文编号：555414