MiR-101调控前列腺癌细胞CRMP4的表达及其机制的初步研究

发布时间：2017-07-18 12:25

  本文关键词：MiR-101调控前列腺癌细胞CRMP4的表达及其机制的初步研究

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【摘要】：目的:探讨mi R-101、EZH2及CRMP4在前列腺癌细胞中表达的相关性;分析前列腺癌中mi R-101是否通过EZH2调控CRMP4基因启动子组蛋白修饰以调控CRMP4基因的表达,以进一步阐明CRMP4的表观遗传学调控机制。方法:使用Lipofectamine 2000分别将pre-mi RNA-101、阴性对照pre-mi RNA negative control,si RNA EZH2,阴性对照si RNA negative control、阳性对照si RNA MAPK-1转染入PC3细胞中。应用荧光显微镜观察各组细胞荧光亮度及比例。运用real-time RT-PCR检测转染效率,以及CRMP4、EZH2 m RNA表达量。使用可抑制EZH2表达及其组蛋白甲基转移酶活性的3-Deazaneplanocin A(DZNEP)处理PC3细胞作为对照;运用Western Blot检测EZH2、C RMP4及H3K27me3、u H2AK119、H3AC在转染及DZNEP处理前后表达的改变。结果:转染6h后,除空白对照组外,各组细胞荧光明亮,约有85%细胞具有荧光。转染48h后real-time RT—PCR显示,pre-mi RNA-101组:mi R-101、CRMP4m RNA表达显著上调,EZH2 m RNA表达显著下调。pre-mi RNA-101组及si RNA EZH2组;CRMP4 m RNA表达显著上调,EZH2 m RNA表达显著下调;转染72h后,pre-mi RNA-101组、si RNA EZH2组、DZNep处理组:CRMP4、H3AC蛋白表达显著上调,EZH2蛋白、组蛋白H3K27me3、u H2AK119蛋白表达显著下调、阴性对照组中的各蛋白表达差异无统计学意义。结论:miR-101可能通过下调EZH2的表达,进而下调与CRMP4基因转录相关的组蛋白H3K27me3、u H2AK119,上调组蛋白H3Ac,继而上调CRMP4表达,从而抑制前列腺癌细胞的转移。
【关键词】：mi RNA PC3细胞 RT-PCR western blot
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第1章 前言7-10
• 第2章 实验材料与方法10-23
• 2.1 材料10-12
• 2.1.1 主要试剂10-11
• 2.1.2 主要仪器和设备11-12
• 2.1.3 前列腺癌细胞系来源12
• 2.2 实验方法及步骤12-22
• 2.2.1 细胞培养12-14
• 2.2.2 转染试剂来源14
• 2.2.3 细胞转染14-15
• 2.2.4 转染 48H后，REAL-TIME RT-PCR检测MIR-101、CRMP4、EZH、MAPK-1 MRNA的表达量变化15-19
• 2.2.5 DZN EP药物干扰19
• 2.2.6 转染及DZNEP处理 72H后，，WESTERN-BLOT检测CRMP4、EZH2、H3K27ME3、H3AC、UH2AK119蛋白表达19-22
• 2.3 统计学数据分析22-23
• 第3章 结果23-28
• 3.1 转染 6H后，荧光显微镜下观察PC3细胞阴性对照组转染效率23
• 3.2 转染 48H后，REAL- TIME RT-PCR检测MIR-101、CRMP4、EZH2、MAPK-1 MRNA的表达量变化23-26
• 3.3 转染及DZN EP处理 72H后，WESTERN-BLO T检测CRMP4、EZH2、H3K27ME3、H3AC、UH2AK119蛋白表达26-28
• 第4章 讨论28-32
• 第5章 结论32-33
• 致谢33-34
• 参考文献34-38
• 综述38-48
• 参考文献44-48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 丁翔;崔凤梅;徐松涛;陆兵;王臻帆;侯建全;严春寅;;微小RNA-101靶向果蝇zeste基因增强子同源物2基因对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响[J];中华实验外科杂志;2014年10期

2 许文剑;苏秀兰;刘明;;miRNA与肿瘤关系的研究进展[J];医学综述;2013年17期

3 韩苏军;张思维;陈万青;李长岭;;中国前列腺癌死亡现状及流行趋势分析[J];中华泌尿外科杂志;2012年11期

4 梁静;恶性肿瘤转移机制及分子基础[J];武警医学院学报;2004年01期

本文编号：557713