CtBP2-c-Myc通路促进前列腺癌进展的分子机制

发布时间：2017-07-26 04:08

  本文关键词：CtBP2-c-Myc通路促进前列腺癌进展的分子机制

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【摘要】：目的:探讨Ct BP2-c-Myc信号通路对前列腺癌细胞生物学行为的影响,并初步揭示其作用机制。方法:运用基因工程手段,截取Ct BP2 m RNA序列对应的c DNA序列片段,重组到载体质粒上,得到Ct BP2高表达质粒。目的质粒转化感受态细胞并经过扩增后转染PC3细胞,利用RT-q PCR及Westernblot技术对其进行验证。分别运用MTT法、Transwell法、Annexin V法检测Ct BP2高表达对PC3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。利用RT-q PCR技术检测Ct BP2高表达对Rho A、Rho B和Rho C m RNA表达水平的影响。查询UCSC数据库,预测Ct BP2能否转录调节Rho C。构建包含Ct BP2与Rho C转录结合区域DNA的质粒。分别运用luciferase和chip技术探究Ct BP2与Rho C是否存在转录调节关系。通过RT-q PCR技术验证Rho C高/低表达的PC3细胞,分别检测对应PC3细胞中的ROCK激酶活性,运用Westernblot技术检测Rho C高/低表达的PC3细胞p-MLC蛋白(ROCK激酶下游底物)表达水平。应用Westernblot技术检测Ct BP2高表达对ROCK1、Rho C、c-Myc及其下游蛋白p-c-Myc、HSPC111表达水平的影响。结果:1.成功构建Ct BP2高表达质粒及PC3细胞系,运用RT-q PCR及Westernblot技术验证了Ct BP2在PC3细胞中的高表达(P0.001);2.通过检测PC3细胞的生物学行为,发现Ct BP2高表达促进PC3细胞的侵袭(P0.05),但未明显影响PC3细胞的增殖(P0.05)和凋亡(P0.05);3.运用RT-q PCR技术检测细胞Rho A、Rho B和Rho C的m RNA表达水平,发现Ct BP2高表达可促进Rho A m RNA(P0.05)和Rho C m RNA(P0.001)的表达,但会抑制Rho B m RNA(P0.01)的表达;4.通过查询UCSC数据库,预测Ct BP2能够转录调节Rho C。成功构建包含Ct BP2与Rho C转录结合区域DNA的质粒,分别运用luciferase和chip技术检测验证Ct BP2与Rho C存在转录调控关系;5.RT-q PCR技术成功验证Rho C高/低表达的PC3细胞系,分别检测其ROCK激酶活性,发现Rho C高表达促进ROCK激酶活性(P0.005),Rho C低表达抑制ROCK激酶活性(P0.005)。Westernblot技术检测Rho C高表达时p-MLC蛋白(ROCK激酶下游底物)表达水平明显增高(P0.005),Rho C低表达时p-MLC蛋白表达水平明显降低(P0.001)。Westernblot技术测得Ct BP2高表达的细胞中ROCK1、Rho C、c-Myc及下游蛋白p-c-Myc、HSPC111表达水平均显著增高(P0.001)。结论:Ct BP2的高表达可促进前列腺癌PC3细胞侵袭。Ct BP2可通过调节c-Myc促进前列腺癌的进展。Ct BP2可成为治疗前列腺癌的一个新靶点。
【关键词】：前列腺癌 CtBP2 c-Myc Rho ROCK 分子机制
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略语/符号说明9-10
• 前言10-14
• 研究现状、成果10-12
• 研究目的、方法12-14
• 对象和方法14-45
• 结果45-60
• 讨论60-64
• 结论64-65
• 参考文献65-70
• 发表论文和参加科研情况说明70-71
• 综述 Rho蛋白家族在恶性肿瘤中的研究进展71-85
• 综述参考文献77-85
• 致谢85-87
• 个人简历87

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1 李鹏昊;CtBP2-c-Myc通路促进前列腺癌进展的分子机制[D];天津医科大学;2016年

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本文编号：574646