NKAIN2真核表达载体的构建与表达鉴定

发布时间：2017-07-27 16:08

  本文关键词：NKAIN2真核表达载体的构建与表达鉴定

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【摘要】：目的 NKAIN2基因位于6号染色体长臂,6号染色体长臂的缺失现象经常发生于各种肿瘤。现构建候选抑癌基因NKAIN2真核表达载体,使其在前列腺癌细胞22RV1中过表达并观察其细胞定位,为进一步功能研究奠定实验基础。方法采用PCR方法扩增NKAIN2基因序列,将其重组于pc DNA4载体中,利用PCR和DNA测序鉴定克隆正确性;并转染到22RV1细胞,Western blot检测其蛋白表达,免疫荧光检测其在细胞中的定位。结果重组质粒中插入正确目的片段,片段大小为627 bp,与预计位置相符。Western blot检测表明,在25 000处检测到目的蛋白条带,与预计大小相符,而阴性对照未检测到相应条带,说明真核表达载体成功转染细胞,并且能够瞬时表达。转染了pc DNA4-FLAG-NKAIN2质粒的22RV1细胞在Petri皿培养24 h后可测到转染的带FLAG-NKAIN2片段的蛋白表达,且过表达的蛋白主要定位于细胞膜和细胞质中。转染未带FLAG标签的pc DNA4质粒未检测到蛋白荧光信号。结论成功构建了pc DNA4-FLAG-NKAIN2真核表达载体,转染22RV1细胞后高表达,为进一步研究NKAIN2在前列腺癌中的生物行为和其发生发展的相互作用机制提供基础。
【作者单位】： 南方医科大学南方医院泌尿外科;南方医科大学病理生理教研室;伦敦大学玛丽皇后学院Barts肿瘤研究所分子肿瘤研究室;
【关键词】： NKAIN 抑癌基因 真核细胞 载体构建
【基金】：国家自然科学基金(81328017) 广东省科技计划项目(2013B051000050)
【分类号】：R737.25
【正文快照】： 0引言NKAIN2基因最初被命名为T细胞淋巴瘤断裂点相关靶标1(T-cell lymphoma breakpoint associatedtarget 1,TCBA1)[1]。根据其功能,它又被称为钠钾转运ATP酶相互作用蛋白2(Na+/K+transportingATPase interacting 2,NKAIN2)。它是一种跨膜蛋白,是NKAIN家族成员之一,其家族成员

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本文编号：582234