CPEB1调控人膀胱癌RT112细胞增殖和迁移的机制研究

发布时间：2017-08-04 06:26

  本文关键词：CPEB1调控人膀胱癌RT112细胞增殖和迁移的机制研究

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【摘要】：背景与目的：在世界范围内，膀胱癌在恶性肿瘤中十分常见的。在中国，其发病率位居泌尿生殖系统肿瘤之首。膀胱癌的发病过程是的一个多基因参与、多因素混合、多步骤形成的，现认为主要是病毒和芳香胺类化合物导膀胱癌的发生。非侵入性低级别的膀胱癌，以染色体9p/q缺失为特征，并且在FGFR3, PIK3CA and HRAS表现为激活突变。CPEB1是胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白家族的一员，它招募翻译抑制物到其目的mRNA3’非翻译区的CPE，，与其特异性序列（UUUUUAU）结合，调控mRNA的多聚腺苷酸化，从而调控mRNA的翻译。CPEB1在胃癌、乳腺癌、骨髓瘤等细胞系中是低表达的，其表达水平的下降与这些恶性细胞促进侵袭和血管生成能力有关。为了探究CPEB1与膀胱癌细胞增殖、迁移的关系，本课题通过CPEB1shRNA干扰载体和Migr1-CPEB1真核表达载体转染RT112细胞，特异性的沉默与过表达CPEB1基因，观察CPEB1对RT112细胞增殖、迁移的影响。 方法：1.首先建立shCPEB1干扰载体和CPEB1过表达载体，转染RT112细胞。2.采用CFU实验检测CPEB1对膀胱癌RT112细胞克隆形成能力的影响。3.CCK-8实验检测CPEB1对RT112细胞增殖能力的影响。4.AnnexinV-FITC染色流式检测CPEB1对RT112细胞凋亡的影响。5.划痕实验和TransWell实验检测CPEB1对RT112细胞迁移的影响。5.WesternBlot检测相关蛋白的表达。 结果：1.CFU结果显示CPEB1过表达实验组比对照组克隆数量少，而shCPEB1干扰组比对照形成的克隆数量增多。2.CCK-8结果显示shCPEB1干扰组比对照组增殖快，而CPEB1过表达实验组比对照组增殖慢。3.AnnexinV染色流式检测结果显示CPEB1过表达和干扰组与对照组相比细胞凋亡率均无差异。4.划痕实验显示CPEB1干扰组比对照组迁移速率慢而CPEB1过表达组比对照迁移速率快。5.TransWell结果显示CPEB1干扰组与对照组相比从上室迁移到下室的速率慢，而CPEB1过表达组比对照组比从上室迁移到下室的速率快。6.WB结果显示CPEB1过表达后与对照组相比cyclinB1蛋白表达水平下调而p21、c-myc、Hif1-α蛋白表达水平上调，CPEB1沉默后cyclinB1蛋白表达水平上调而p21、c-myc、Hif1-α蛋白表达水平下调。 结论：CPEB1能抑制RT112细胞增殖和克隆形成的能力，并且能促进RT112细胞的迁移能力，可能是通过调控p21、cyclinB1、c-myc和Hif1-α等基因的表达而实现的。
【关键词】：膀胱癌RT112细胞 CPEB1 增殖 迁移
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文缩略词8-11
• 第一章 绪论11-21
• 1 膀胱癌概述11-12
• 1.1 发病原因11
• 1.2 分子机制11-12
• 1.3 膀胱癌治疗的研究现状12
• 1.4 展望12
• 2 CPEB1 研究进展12-20
• 2.1 翻译调控的简介13-14
• 2.2 CPEB1 调控 mRNA 转录后修饰14-17
• 2.3 CPEB 在增殖的作用17-18
• 2.4 CPEB 在衰老中的作用18-19
• 2.5 CPEB1 在癌症中的作用19-20
• 3 CPEB1 与膀胱癌20-21
• 第二章 材料与方法21-40
• 1 常用实验材料21-25
• 1.1 主要生化和分子生物学试剂21-23
• 1.2 主要实验仪器23
• 1.3 细胞系23
• 1.4 质粒及载体23-25
• 2 实验方法25-40
• 2.1 建立 CPEB1 表达载体25-37
• 2.2 CPEB1 对 RT112 细胞增殖的影响37-38
• 2.3 CPEB1 影响 RT112 细胞增殖和迁移的分子机制研究38-40
• 第三章 实验结果40-51
• 1 CPEB1 表达载体和干扰载体的建立40-45
• 1.1 CPEB1 干扰质粒的真核表达载体构建40-42
• 1.2 CPEB1 过表达质粒的真核表达载体构建42-44
• 1.3 RT112 细胞转染44-45
• 2 CPEB1 对 RT112 细胞增殖和迁移的影响45-50
• 2.1 CFU 实验45-46
• 2.2 AnnexinV-FITC 染色检测细胞凋亡46-47
• 2.3 Cell Counting Kit-8 检测细胞增殖47-48
• 2.4 划痕实验检测 CPEB1 对 RT112 细胞迁移的影响48-49
• 2.5 Transwell 实验检测 CPEB1 对 RT112 细胞迁移的影响49-50
• 3 CPEB1 影响 RT112 细胞相关蛋白表达的检测50-51
• 第四章 讨论51-54
• 第五章 结论54-55
• 参考文献55-61
• 致谢61-62
• 附录62-64

【共引文献】

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本文编号：618116