稳定敲低SIGIRR的人肾小管上皮细胞的构建及其初步功能的研究

发布时间：2017-08-06 22:16

  本文关键词：稳定敲低SIGIRR的人肾小管上皮细胞的构建及其初步功能的研究

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【摘要】：目的建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与GV248-GFP-Puro慢病毒载体连接产生重组体(GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR)。将测序验证正确的重组体与包装质粒(p MDL、pRev、p VSVG)共转染293T细胞进行病毒包装,收集病毒并感染HKC细胞。实时荧光定量PCR(qRTPCR)和Western blot法分析检测HKC细胞中SIGIRR干涉效率。应用白细胞介素-1β(IL-1β)刺激成功敲低SIGIRR的HKC细胞及对照细胞,Western blot法检测其下游核转录因子NF-κB(p65)的磷酸化水平,qRT-PCR分析单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常T细胞表达和分泌的活化调节蛋白(RANTES)mRNA水平。结果成功构建重组慢病毒载体GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR。qRT-PCR和Western blot法均证实在HKC细胞中成功敲低SIGIRR的表达。此外,IL-1β刺激后,与对照细胞相比,敲低SIGIRR的HKC细胞(HKC/sh SIGIRR)的p65磷酸化水平上调,MCP-1和RANTES mRNA表达水平升高。结论 HKC的炎症反应中,SIGIRR蛋白对Toll样受体/白介素1受体(TLR/IL-1R)通路起"刹车"作用。该研究为狼疮性肾炎的治疗提供了新的潜在的靶点。
【作者单位】： 安徽医科大学第二附属医院肾脏内科;安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;安徽医科大学药学院;安徽医科大学第一临床学院;安徽医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计系;
【关键词】： 狼疮性肾炎 人肾小管上皮细胞 SIGIRR 慢病毒载体 NF-κB 趋化因子
【基金】：安徽省博士后科学基金(编号:9101019202) 中国博士后科学基金(编号:2012M511399) 国家自然科学基金(编号:81101524、81372475、81172591)
【分类号】：R593.242
【正文快照】： 2014-10-23接收狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)最常见的并发症之一,而肾脏受累的严重程度对SLE患者死亡率及预期寿命有显著影响[1-2]。但LN发病机制尚未完全明确。研究[3-7]提示LN的发生和发展与肾小管上皮细胞内Toll样受

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吴学玲;张椿;赵云峰;钱桂生;;SIGIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响[J];西部医学;2009年04期

2 黄勋;梁晓华;田丰;姜涛;;SIGIRR对HMGB1诱导的A549细胞炎性反应的影响[J];中国呼吸与危重监护杂志;2011年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 杨波;张志培;姜鹏;尚荣鑫;韩国梁;葛鹏;姜涛;;褪黑素对大鼠肠缺血再灌注肺损伤及N-myc下游调节基因2表达的影响[J];中国呼吸与危重监护杂志;2013年01期

2 梁晓华;黄勋;田丰;高坤祥;王艳;李小飞;姜涛;;单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白在脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织中表达的研究[J];中国呼吸与危重监护杂志;2013年06期

3 谢席胜;高薇;冯胜刚;张菊;;狼疮肾炎的生物靶向治疗[J];西部医学;2014年11期

4 赵巍;王小平;周勇安;闫小龙;倪云峰;田丰;;单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白对香烟烟雾提取物刺激A549细胞后产生效应的影响[J];中国呼吸与危重监护杂志;2015年01期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 张宁;TLR信号通路有关基因与系统性红斑狼疮的相关性研究[D];安徽医科大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 田丰;王云杰;赵晋波;张志培;姜涛;;SIGIRR在人正常肺组织及脂多糖诱导的肺泡上皮细胞急性损伤中的表达[J];中国呼吸与危重监护杂志;2009年03期

【相似文献】

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 钱桂生;;SIGIRR对小鼠内毒素性急性肺损伤的保护作用研究[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年

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本文编号：631695